IMEX   05356
INSTITUTO DE MEDICINA EXPERIMENTAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
DNA-PKcs, Rad21 y ATM colaboran en regular la progresión de rearreglos cromosómicos inducidos por etopósido en la fase G2 de células humanas
Autor/es:
PALMITELLI M; DE CAMPOS NEBEL M; GONZÁLEZ CID M
Lugar:
Ciudad Autonoma de Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XIX Congreso Argentino de Toxicología. I Jornadas de la Asociación Latinoamericana de Mutagénesis, Carcinogénesis y Teratogénesis Ambiental.; 2015
Institución organizadora:
Asociación Toxicológica Argentina
Resumen:
La incorrecta reparación de rupturas de doble cadena (RDC), lesiones tóxicas en el ADN, genera rearreglos cromosómicos, inestabilidad genómica y cáncer. Etopósido (ETO), droga antitumoral, produce RDC persistentes y neoplasias secundarias caracterizadas por la translocación del gen MLL en los pacientes tratados. Las células utilizan las vías de recombinación homóloga (HR) y reunión de extremos no-homólogos dependiente de DNA-PKcs para reparar las RDC. Nuestro trabajo analizó la función de DNA-PKcs, Rad21 (cohesina que facilita HR) y ATM en la progresión de RDC y la formación de rearreglos cromosómicos inducidos por ETO en la fase G2 de células humanas. Se generaron las líneas celulares HeLa Rad21kd (deficiente en Rad21) y HeLa NS (control no-silenciante) transfectando con shRNAmir. Las células se trataron con ETO 2µg/ml en presencia o no del inhibidor químico de DNA-PKcs (NU7026 10µM) o de ATM (KU55933 10µM), se obtuvieron células binucleadas (BN) mediante citocalasina B (3µg/ml) en las que se evaluaron las RDC (γH2AX) en núcleos, micronúcleos (MN) y puentes cromatínicos por inmunomarcación y los rearreglos del gen MLL por FISH en la fase G1 posmitótica. En células HeLa Rad21kd, la inhibición de ATM con KU55933 en presencia de ETO no confirió un aumento adicional de núcleos con >20 focos γH2AX (38,6±0,3% vs 41,1±22,5%), de MN (43,3±14,6% vs 37,4±20,1%) y de puentes cromatínicos con focos γH2AX (3,7% vs 4,3%) en comparación con células Rad21kd tratadas solo con ETO. Sin embargo, ETO en combinación con NU7026 incrementó el porcentaje de núcleos con >20 focos γH2AX (82,8±2,1% vs 21,7±4,7%), duplicó los puentes cromatínicos y aumentó en ~50% el porcentaje de células con el gen MLL rearreglado (7,2% vs 4,9%) en células HeLa Rad21kd en relación a HeLa NS. Los resultados sugieren que Rad21 y ATM impiden la progresión de RDC actuando en un proceso común mientras que Rad21 y DNA-PKcs suprimen la reunión incorrecta de RDC y la inducción de rearreglos cromosómicos del gen MLL.