Leucemia Linfática Crónica (LLC): Efecto de los inhibidores de la tirosina quinasa Syk, Fostamatinib (R406) y Entospletinib (GS-9973), sobre los linfocitos T y la acción anti-tumoral del rituximab

COLADO ANA; ALMEJÚN MARÍA BELÉN; PODAZA ENRIQUE; RISNIK DENISE; BURGOS ANGEL; BEZARES FERNANDO RAIMUNDO; CABREJO MARÍA; FERNANDEZ GRECCO HORACIO; GIORDANO MIRTA; GAMBERALE ROMINA; BORGE MERCEDES

Mar del Plata

Congreso; XXII Congreso Argentino de Hematología; 2015

Las células leucémicas de los pacientes con LLC proliferan en los órganos linfoides gracias al contacto con linfocitos T (LT) CD4 activados, células mieloides, el estroma y señales percibidas a través de su receptor antigénico (BCR). El desarrollo de drogas que bloquean la señalización a través del BCR como los inhibidores de Syk, R406 y GS-9973, y los inhibidores de Btk, ibrutinib y CC-292, han mostrado resultados muy alentadores en ensayos clínicos con pacientes LLC. Recientemente se demostró que el ibrutinb tiene efectos no sólo sobre el clon leucémico sino que también modula la activación de los LT e inhibe a las células que median la acción anti-tumoral del rituximab.En este trabajo nos propusimos evaluar el efecto de los inhibidores R406 y GS-9973 sobre: 1) la funcionalidad de los LT de pacientes con LLC y 2) la capacidad de los macrófagos de fagocitar células LLC opsonizadas con rituximab.Para el primer objetivo se activaron los LT presentes en las células mononucleares de sangre periférica de pacientes LLC a través de su receptor antigénico con anticuerpos específicos para CD3 en presencia o ausencia de los inhibidores. A las 24 horas se evaluó por citometría de flujo la expresión de los marcadores de activación CD25, CD69 y CD40L sobre los LT. La proliferación se midió a los 5 días mediante el método de dilución de CFSE. La migración de los LT se evaluó utilizando el método de Transwells. Para el segundo objetivo se diferenciaron macrófagos a partir del cultivo de monocitos con M-CSF. La fagocitosis de células LLC marcadas con CFSE y opsonizadas con rituximab se cuantificó por citometría de flujo y se confirmó por microscopía confocal.Con respecto al primer objetivo encontramos que dosis clínicamente relevantes de GS-9973 y R406 (1µM) inhibieron el aumento de expresión de CD25, CD69 y CD40L sobre los LT activados, así como también su proliferación (Figura 1A-D). Por otro lado observamos que la migración de los LT en respuesta a las quimiocinas que los atraen hacia los órganos linfoides, CCL19 y CCL21, sólo se vio afectada a dosis 5 µM (Figura 1E y F). En relación al segundo objetivo encontramos que ambas drogas inhibieron la fagocitosis de células LLC opsonizadas con rituximab a concentraciones clínicamente relevantes (Figura 1G). Nuestros resultados demuestran que los inhibidores GS-9973 y R406 actúan también sobre el microambiente tumoral. Por un lado, inhiben la activación y proliferación de los LT de pacientes con LLC, reduciendo de ese modo las señales que favorecen la acumulación del clon leucémico. Sin embargo, estos resultados también sugieren que en tratamientos prolongados la respuesta inmune celular de los pacientes podría estar comprometida. Por otro lado, dado que GS-9973 y R406 interfieren con la acción del rituximab, nuestros resultados sugieren que en terapias combinadas con alguno de estos inhibidores y el rituximab sería conveniente su administración secuencial y no simultánea.