.- EXPRESIÓN REDUCIDA DE BCR-ABL EN PRECURSORES PRIMITIVOS PROVENIENTES DE PACIENTES CON LEUCEMIA MIELOIDE CRÓNICA TRATADOS CON INHIBIDORES DE TIROSÍN QUINASA).

RUIZ S; BAFFA TRASCI SOFIA; MOIRAGHI B; PEREZ M; FONCUBERTA C; PAVLOVSKY C; MORDOH J; LARRIPA I; SANCHEZ AVALOS J; BIANCHINI M

Mar del Plata

Congreso; XXI CONGRESO ARGENTINO DE HEMATOLOGÍA (SAH); 2015

Sociedad Argentina de Hematología

IntroducciónEn la mayoría de los pacientes con Leucemia mieloide crónica (LMC) se puede detectar una población de células madre leucémicas (LSC) que exhiben insensibilidad al Imatinib (IMA). En aquellos con enfermedad residual indetectable, se desconoce si éstos se encuentran curados de forma definitiva, o si la persistencia de LSC representa un potencial riesgo de recurrencia de la enfermedad. Estos antecedentes sugieren que la caracterización de LSC por ensayos funcionales podría resultar de interés para la práctica clínica.ObjetivosEvaluar la carga de LSC en pacientes con LMC durante el tratamiento con inhibidores de tirosín quinasa (ITK).Material y MétodosSe procesaron muestras de médula ósea de pacientes al diagnóstico, o con diferentes niveles de respuesta molecular (RM) inducida por tratamiento con IMA o nilotinib. Todos los pacientes dieron su consentimiento informado. Fracciones enriquecidas en células CD34+ fueron utilizadas como células iniciadoras en ensayos clonogénicos de 2 semanas para progenitores (CFU), y ensayos funcionales de cultivo de largo término de 6 semanas para la detección de células primitivas (LTC-IC). Las colonias obtenidas fueron cuantificadas, clasificadas y lisadas para la extracción de ARN total. Se realizó RT-qPCR en colonias individuales o pooles de colonias. Los análisis estadísticos fueron realizados utilizando modelos lineales mixtos generalizados.ResultadosEn ensayos CFU, las colonias individuales provenientes de pacientes de reciente diagnóstico expresaron altos niveles de BCR-ABL/ABL (media=23%, SD=6%, n=4). Sin embargo, a nivel de colonias individuales, no fue posible detectar su expresión en pacientes con RM en sangre periférica (SP) menor al 1% BCR-ABL/ABL, con la excepción de 2 colonias (n=8) (Fig. 1a). En ensayos LTC-IC, no fue posible detectar BCR-ABL a nivel de colonias individuales en ningún caso, incluso en pacientes de reciente diagnóstico (n=5) (Fig. 1b). Dado que la cantidad de ARN que puede extraerse a partir de una colonia individual es limitada, con el objetivo de aumentar la sensibilidad se realizaron pooles de 3-15 colonias. En estas condiciones, fue posible detectar mRNA BCR-ABL en LTC-IC de pacientes con RM en SP hasta RM3.0, pero se mantuvo indetectable en aquellos pacientes con RM más profundas (RM4.0-RM5.0) (n=10) (Fig. 1b). Por otro lado, el número de colonias obtenido en ensayos de CFU fue mayor en pacientes con alta carga leucémica que en aquellos con RM≤1% (p