Protocolo de prime-boost induce respuesta sistémica y local específica contra Stx2 implicada en el Síndrome Uremico Hemolítico (SUH)

BENTANCOR L.; MEJIAS M.P.; PANEK A.; DEL POZO GOMEZ P.A.; FERNANDEZ-BRANDO R.J.; FERNANDEZ G.C.; RAMOS M.V.; GHIRINGHELLI D.; FERREIRA L.C.S.; PALERMO M.S.

Cordoba

Congreso; LVI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI); 2008

Sociedad Argentina de Inmunología

La infección con E.coli productor de toxina Shiga (Stx) causa colitis hemorrágica y puede complicarse en la forma de Síndrome Urémico Hemolítico (SUH).  Las vacunas experimentales ensayadas contra el SUH no fueron efectivas debido, en parte, a que la subunidad B tiene bajo potencial inmunoprofiláctico y la subunidad A es tóxica. Nosotros desarrollamos una construcción plasmídica que conserva los últimos 31 aas. de la subunidad A y la subunidad B completa (pStx2DAB). Con el propósito de optimizar la respuesta inmunológica, y evaluar el papel de la respuesta local en mucosas, se seleccionó una cepa atenuada de Salmonella SL3261, conteniendo la secuencia Stx2DAB clonada en un vector de expresión para Salmonella bajo un promotor inducible in vivo(SL3261Sx2DAB).  Ratones BALB/c fueron inmunizados mediante un protocolo de prime-boost, en el cual recibieron dos dosis de 50mg de pStx2DAB i.m. a los días 0 y 15; las dos dosis de SL3261Sx2DAB fueron dadas a las 8 y 10 semanas de la última dosis de plásmido, se inoculó un grupo con SL3261Stx2DAB inducida y otro grupo con SL3261Stx2DAB no inducida.Se recolectó materia fecal y suero de los ratones inmunizados con el plan prime-boost (DNA-Salmonella)  para determinar el título de IgA e IgG específicos respectivamente a 15d.p.v., expresado como la inversa de la última dilución que dio positiva.  Se pudo observar que no hubo diferencia significativa entre la respuesta local específica al utilizar SL3261DAB inducida o no inducida como booster (n=6,1280), También se pudo observar que el protocolo de inmunización mixta aumentó significativamente la respuesta local respecto a la desarrollada solo con  SL3261Stx2DAB (pStx2DAB+ SL3261DAB inducida o no inducida=1280;  pStx2DAB + SL3261=320; pcDNA3.1+ SL3261DAB inducida=160; pcDNA3.1+SL3261DAB no inducida=80; pcDNA3.1+SL3261=80). Por otro lado, se pudo observar que hubo diferencia significativa en la respuesta específica sistémica al inmunizar con SL3261DAB inducida (480, n=6, p<0.05) respecto a SL3261Stx2DAB no inducida 260, n=6, p<0.05) como booster. Estos resultados indican que la inoculación oral de SL3261Stx2DAB como booster, permitió generar respuesta local específica contra Stx2, no obtenida utilizando el mismo antígeno como vacuna a DNA.  También se observó un aumento en la respuesta sistémica específica respecto a los protocolos donde solo se inmunizó con plásmido.