Papel de la PI3K en la modulación del receptor para fractalquina, (CX3CR1), en monocitos humanos.

MV RAMOS; G. C. FERNANDEZ; R. J. FERNÁNDEZ BRANDO; L. V. BENTANCOR; V. LANDONI; M. A. ISTURIZ; M. S. PALERMO

Mar del Plata

Congreso; LII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC), LV Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI); 2007

SAI/SAIC

La fractalquina (CX3CL1), quimioquina expresada en endotelio inflamado, actúa como molécula de adhesión interactuando con su receptor, CX3CR1, presente en monocitos (Mo). La interacción entre CX3CL1-CX3CR1 podría contribuir al daño renal en el Síndrome Urémico Hemolítico. Analizamos la modulación de CX3CR1 en Mo con factores inflamatorios ó anti-inflamatorios. Se purificaron Mo de sangre periférica y se incubaron durante 20 hs en Medio, IL-10 (10ng/ml) ó IFN-γ (240U/ml) para analizar la expresión de CX3CR1 mediante citometría de flujo. Se observó un descenso significativo en el porcentaje de Mo CX3CR1+ durante el cultivo, el cual se inhibe en presencia de IL-10 ó IFN-γ (0h: Medio =80±2%; 20h: Medio= 49±4%*, IL-10=73±4%#,IFN-γ =67±9#); *p<0.05 vs 0h, #p<0.05 vs 20h Medio; n=8). El efecto de IL-10 se bloquea en presencia de los inhibidores de PI3K: LY294002 (30μM) y wortmanina (Wo, 100nM), (IL-10+Wo=29±9%; IL-10+Ly=49±8%, n=3). Efectos similares se observaron con IFN-γ. Los inhibidores de síntesis proteica, cicloheximida (CHX;1µg/ml) y actinomicinaD (ActD;0.5µg/ml), también evitan este descenso. (Medio=23.9±7.25; CHX= 48.5± 9.7#; ActD= 76.8± 2.7; #p<0.05 vs. Medio, n=4). Se validó el modelo en células THP1, previamente diferenciadas con PMA (5ng/ml) durante 48hs. (Medio= 67±3%, IL-10: 81±3%*, IFN-γ:72±6%*,(*p<0.05 vs Medio, n=7); IL-10+Wo=55±8%; IL-10+Ly=56±7%,n=3, p<0.05 vs IL-10). Luego, con la técnica de Western Blot, se analizó la activación de los factores de transcripción, Stat3 y Stat1, implicados en el mecanismo de transducción de IL-10 e IFN-γ. Se encontró que IL-10 fosforila a ambos factores mientras que el IFN-γ sólo al Stat1. Concluimos que la expresión de CX3CR1 es modulada por factores inflamatorios/anti-inflamatorios, y que la actividad de PI3K está implicada en los mecanismos de transducción de IFN-γ e IL-10. Además, la CHX y ActD impiden el descenso de CX3CR1, probablemente evitando la expresión de novo de alguna proteína implicada en dicha modulación