Inter-relación funcional entre DNA-PKcs y ATM frente al daño inducido por Etoposido en la fase G2

PALMITELLI M; DE CAMPOS NEBEL M; GONZALEZ CID M

Bariloche

Congreso; XLIII Congreso Argentino de Genética. IV Reunión Regional SAG-La Pampa Patagonia; 2014

Sociedad Argentina de Genetica

Las proteínas-quinasas DNA-PKcs y ATM protegen la integridad genómica frente a las rupturas de doble cadena (RDC). Etoposido (ETO), droga antitumoral, estabiliza los complejos ADN-Topoisomerasa II generando RDC persistentes. Se evaluó el rol de DNA-PKcs y ATM en reparar las RDC inducidas por ETO en G2. La línea celular humana HeLa deficiente en ATM (ATMkd) y su control no-silenciante (NS) se obtuvieron utilizando secuencias shRNAmir y evaluaron por qRT-PCR y expresión proteica. Las células se trataron con ETO 2µg/ml en presencia o no del inhibidor de DNA-PKcs, NU7026 (10µM). En ambas líneas celulares, las rupturas e intercambios cromatídicos por metafase aumentaron en relación a sus controles respectivos. El tratamiento con NU7026-ETO en células ATMkd duplicó el valor de rupturas cromatídicas inducidas en NS. En cambio, las figuras de intercambio cromatídico se mantuvieron al mismo nivel en ambas líneas celulares tratadas con ETO, con una frecuencia aumentada NU7026-ETO. Este efecto fue acompañado de una reducción marcada de células mitóticas evaluadas por inmunomarcación (pSer10H3). Se analizaron las RDC (pSer139H2AX) persistentes en los núcleos principales de células binucleadas en G1 posmitótico. El 26,8% de las células ATMkd mostró >20 focos γH2AX luego del tratamiento con ETO y ese valor fue del 21,7% en NS luego de NU7026-ETO. En ausencia de ambas actividades proteicas, el 48,2% presentó >20 focos γH2AX. Estos resultados indicaron que DNA-PKcs y ATM cumplen funciones complementarias para asegurar una completa y correcta reparación de las RDC inducidas por ETO.