Alupatías: caracterización de las rupturas de una gran delecion del exón 10 del F8 que involucra a un elemento ALU como causa de hemofilia A severa.

ABELLEYRO MM; ROSSETTI LC; RADIC CP; MARCHIONE VD; CANDELA M; LARRIPA IB; DE BRASI CD

Salta

Congreso; XLII Congreso de la Sociedad Argentina de Genética (SAG); 2013

Sociedad Argentina de Genética (SAG)

Las grandes deleciones del gen del factor VIII (F8) representan 8-15% de las hemofilias A (HA) severas (s). En HA, aunque fueron caracterizadas pocas grandes deleciones con sus puntos de ruptura, pudieron involucrarse mecanismos de recombinación homóloga, entre secuencias repetidas, y no-homóloga. Este trabajo presenta la caracterización molecular completa de una gran deleción del F8 detectada en un paciente con HAs por ausencia consistente de amplificación del exón 10. La amplificación por PCR de larga distancia desde el exón 9 al 11 sobre muestra de la madre del paciente mostró dos productos, el alelo normal predicho 9,419kb y el mutado, 6,2kb (la muestra del paciente no presentaba calidad suficiente para amplificación >2kb). El análisis de restricción múltiple del alelo mutado permitió diseñar primers en el IVS9 e IVS10 para la amplificación estándar de la deleción en muestras del paciente y su madre. La secuenciación del producto del alelo mutado (987bp) permitió caracterizar una deleción de 3147bp (ChrX:154190654-154187507). La ruptura 5?-IVS9 involucra un residuo de un elemento LINE/L2 y la 3?-IVS10, un elemento AluJb casi completo, y sólo presenta microhomología en los extremos comunes AATTT indicando un mecanismo de recombinación no-homologa. La recurrencia de elementos Alu en las rupturas asociadas a grandes rearreglos genómicos (por recombinación homóloga o no-homóloga) confirmada en nuestro paciente con HAs sugiere reenfocar la investigación in vitro de los mecanismos involucrados sobre estas repeticiones abundantes en el genoma humano (n=106).