EVALUACIÓN DE LA CAPACIDAD FUNCIONAL DE LAS SECUENCIAS PROMOTORAS DE LA TOXINA SHIGA (STX) EN CÉLULAS EUCARIOTAS

BENTANCOR L; BILEN M.F.; MEJIAS M.P.; FERNANDEZ-BRANDO R.J; PANEK C.A; RAMOS M.V; FERNANDEZ G.C.; ISTURIZ M.A; GHIRINGHELLI D.; PALERMO, M.S

Mar del Plata

Congreso; LVII REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) LX REUNIÓN ANUAL Sociedad Argentina de Inmunología (SAI); 2012

SAIC/SAI

La toxina Shiga está formada por una subunidad A y cinco subunidades B. Mediante estudios in silico de las regiones promotoras de ambas subunidades, encontramos dos fragmentos con alta probabilidad de ser reconocidas en un entorno eucariota y fueron denominadas pr1 y pr7. Dichos fragmentos presentaron un score de 0.99 y 0.97 respectivamente. El objetivo de este trabajo fue evaluar la capacidad de la maquinaria eucariota de expresar Stx2 funcionalmente activa. Se realizaron construcciones plasmídicas en las cuales se clonó la secuencia codificante para GFP bajo el control de pr1 y pr7. Observamos por microscopía confocal la expresión de GFP en células eucariotas transfectadas con ambas construcciones, mientras que los controles transfectados con Dpr-GFP no mostraron fluorescencia. Células con distinta susceptibilidad a Stx2 (Vero y BHK) fueron transfectadas con el plásmido pGEMT conteniendo la secuencia codificante para Stx2 (pStx2). Al transfectar células Vero observamos efecto citotóxico similar al observado en células incubadas con Stx2 purificada (DO Stx2: 0.77 + 0.06; pStx2:0.69 + 0.07). Células transfectadas con pGEMT no mostraron citotoxicidad (DO pGEMT: 1.27+ 0.06; Vero sin tratar: 1.40 + 0.14). Al utilizar sobrenadantes de células transfectadas con pStx2 sobre células Vero naïve, observamos daño citotóxico específico de Stx2, ya que fue neutralizado con suero policlonal anti-Stx2 (DO-pStx2 vs DO-pStx2 + anticuerpo P