DETECCION DE GRANDES DELECIONES HETEROCIGOTAS POR QRT-PCR. SU APLICACION AL DIAGNOSTICO DE PORTADORAS EN HEMOFILIA A SEVERA

ABELLEYRO M; ROSSETTI L; RADIC P; LARRIPA I; DE BRASI C

Rosario

Congreso; XV Congreso Latinoamericano de Genetica; 2012

Sociedad Argentina de Gen¨¦tica

Segun distintas series internacionales, el 5-15% de los pacientes con hemofilia A (HA) severa presenta grandes deleciones (GD)(>100pb) del gen del factor VIII (F8). La deteccion molecular heterocigota de GD para diagnostico de portadoras de HA esta dificultada por la presencia del alelo no-mutado. Para abordar el diagnostico heterocigota de GD en HA, se desarrollo y valido un metodo basado en medicion relativa de dosis genica mediante QRT-PCR (PCR cuantitativa en Tiempo-Real), entre una region especifica (Xq28-F8) involucrada (T) (sobre el Promotor y el exon 26) y una region referencia (2q33-CTLA4) no involucrada (R). Como poblaciones control de simple dosis (T/R=1/2) y doble dosis (T/R=2/2), se utilizaron varones (46;XY) (V) y mujeres (46;XX) (M) de la poblacion general, respectivamente. La distribucion de dosis T/R en las poblaciones control V (N=15) y M (N=15) permitio ajustar curvas de Gauss que no mostraron solapamiento. La interpolacion de los valores T/R de las mujeres familiares en riesgo (eventuales portadoras) en estas curvas permitio su caracterizacion como portadoras o no portadoras. Cuatro familias con HA severa fueron analizadas: dos familias con GDs que involucran al exon 26 (2/4 mujeres familiares resultaron portadoras) y dos familias con deleciones que involucran al promotor del F8 (3/4 mujeres familiares resultaron portadoras). Conclusion: el metodo basado en QRT-PCR permite clasificar portadoras heterocigotas de GDs causales de HA.