IMEX   05356
INSTITUTO DE MEDICINA EXPERIMENTAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
"Simposio de Investigadores Jóvenes". Tema: Investigación de la asociación genotipo-fenotipo en Hemofilia. Desarrollo de nuevos abordajes diagnósticos. Su implicancia en el asesoramiento genético.
Autor/es:
ROSSETTI L.C.
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Simposio; LVII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y la LX Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología 2012; 2012
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y Sociedad Argentina de Inmunología (SAI)
Resumen:
La hemofilia es una coagulopatía hereditaria, ligada al cromosoma X, que afecta a 1 cada 5.000 varones en todas las poblaciones humanas. Puede clasificarse en hemofilia A (HA) debida a mutaciones deletéreas en el gen del factor VIII de coagulación (F8)(Xq28) y hemofilia B (HB) asociada al factor IX (F9)(Xq27.1). La HA se presenta con una frecuencia 5 veces mayor que la HB, y puede sub-clasificarse en severa (se) (FVIII:C/FIX:C < 1UI/dl) y moderada/leve (1UI/dl < FVIII:C/FIX:C < 20UI/dl). Nuestro Laboratorio de Genética Molecular en Hemofilia (GMH) es único en el país y pionero en Latinoamérica, y sus objetivos permanentes son investigar los mecanismos involucrados en la relación genotipo-fenotipo en Hemofilia y proveer de un esquema óptimo de análisis del F8 y F9 mediante el desarrollo de nuevos abordajes de análisis del genoma humano. Debido al gran tamaño (186kb) y complejidad (26 exones) del F8 la caracterización de la mutación causal de HA aún constituye un desafío experimental de magnitud. La inversión del intrón 22 (Inv22) y del intrón 1 (Inv1) son las únicas mutaciones recurrentes en hemofilia y causan aproximadamente la mitad de las hemofilias A severas en todo el mundo sin diferencias étnico-geográficas (42-44%, y 2-5%, respectivamente). El resto de los casos de HA y HB involucran todo tipo de mutaciones incluyendo grandes y pequeñas deleciones o inserciones, y mutaciones puntuales (sustituciones nuleotídicas) asociadas a defectos tipo missense, nonsense y del splicing. Por sobre el análisis indirecto por ligamiento familiar, la caracterización de la mutación causal es hoy la ruta preferida para obtener información segura para asesorar a las familias con hemofilia (diagnóstico de portadoras y prenatal). Nuestro grupo de GMH ha diseñado y  optimizado un algoritmo de diagnóstico molecular para cubrir el análisis completo del F8 y F9. En este esquema se incluye el desarrollo de un abordaje original para el análisis de las inversiones recurrentes en seHA -Inv1 e Inv22 (sus patrones tipo 1 y tipo 2, y también eventuales duplicaciones y deleciones)- denominado inverse shifting-PCR (IS-PCR), técnica también aplicable al análisis de muestras de DNA genómico extraído de vellosidades coriónicas. El esquema también incluye la amplificación del F8 (o F9) para detección y análisis de grandes deleciones por PCR de larga distancia, el screening de pequeñas mutaciones por CSGE (conformation sensitive gel electrophoresis), y secuenciación automática-fluorescente. A diferencia de los afectados por otras enfermedades genéticas, los pacientes con hemofilia pueden ser tratados por sustitución intravenosa del factor de coagulación defectuoso, permitiendo una expectativa de vida normal. Sin embargo, el desarrollo de anticuerpo inhibidor neutralizante de la terapia sustitutiva constituye una complicación médica severa que torna inefectiva la terapia convencional y compromete al 20-30% de pacientes con seHA y al 5-6% con seHB. La terapia alternativa con agentes bypassing es aún más costosa que la convencional. Se ha demostrado que la patogénesis de los inhibidores contra el FVIII es un rasgo multifactorial influenciado por factores genéticos y ambientales. La relación más fuerte que se ha encontrado es con el tipo de mutación causal. Aquellas mutaciones que previenen la síntesis endógena (null mutations), como grandes deleciones, mutaciones nonsense y la Inv22, están asociadas a un alto/moderado riesgo relativo a desarrollar de inhibidor, mientras que las mutaciones missense, pequeñas deleciones/inserciones y mutaciones que afectan el splicing,  a un bajo riesgo. Sin embargo, algunos pacientes con mutaciones de alto riesgo no desarrollan inhibidor, poniendo en evidencia que aún faltan encontrar otros factores involucrados. Recientemente, se ha reportado una asociación significativa entre formación de inhibidor y presencia de polimorfismos en genes que codifican citoquinas y otros factores inmunoregulatorios: IL10, TNFA, CTLA4. En consecuencia, consideramos importante elucidar los factores genéticos adicionales que configuran el perfil del riesgo genético individual del paciente hemofílico en nuestra población. Estas asociaciones genotipo-fenotipo específicas de nuestra población permiten predecir tempranamente, por ejemplo, el riesgo a desarrollar inhibidor del paciente sobre la base de la información recibida del laboratorio de genética molecular y así diseñar la mejor terapia y seguimiento. Hacia el futuro, nuestros objetivos están reenfocados tanto a la elucidación e incorporación de toda la información genética relevante para el paciente con hemofilia y su familia, como a su análisis experimental de manera costo-efectiva para el sistema de salud.