Inversiones altamente recurrentes en Hemofilia. Desafíos al ingenio para el diagnóstico molecular

DE BRASI CD

Rosario

Simposio; Congreso ALAG. Simposio "Enfermedades Genómicas".; 2012

Asociación Latinoamericana de Genética ALAG

La hemofilia A (HA) es una coagulopatía ligada al cromosoma X (X) causada por defectos en el gen factor VIII (F8). La HA severa se expresa en sangrados prolongados internos y externos, y hemartrosis progresivas y discapacitantes. Las inversiones mediadas por recombinación entre repeticiones invertidas no presentan ni variación en el número de copias ni diferentes secuencias de ADN lo que dificulta su diagnóstico molecular. Entre ellas, la inversión del intrón 22 (Inv22) del F8 causa el 45% de las HA severas sin diferencias étnico-geográficas. La Inv22 ocurre por recombinación no-alélica entre un segmento presente en el F8 intrón 22 (int22h-1, h1) (10kb) y la más distal de dos copias de h1 ubicadas en los brazos de un gran palíndromo imperfecto en Xq28 (h2/h3). Liberada la secuencia del X humano, se precisó la orientación opuesta de h3 y h2, y se dedujo que sólo la recombinación de h1 con la copia distal de h2 o h3 generaría inversiones, pero no la copia proximal con la que sólo generaría deleciones y duplicaciones. Para justificar la Inv22 con h2 y h3 se hipotetizó una gran inversión no-deletérea que intercambia h3xh2. Esta complejidad genómica posible sólo podía resolverse por Southern blot pues las técnicas de análisis rápido propiciaban errores diagnósticos. Para genotipado rápido y exacto de todas las especies de int22h (i.e., Inv22, deleciones y duplicaciones) se diseñaron métodos de PCR-larga distancia y PCR-inversa. Todo esto fue posible por poder contar con hipótesis in silico de cada uno de estos rearreglos usando las secuencias del Proyecto Genoma Humano.