LA DETECCIÓN DE MUTACIONES EN BCR-ABL1 IMPLICA SIEMPRE RESISTENCIA CLINICA?

NORIEGA F; FERRI C; ICARDI G; BENGIO R; LARRIPA I

Punta del Este

Congreso; XII Congreso Uruguayo de Hematología; 2012

Sociedad Uruguaya de Hematología

En la LMC el mecanismo mas frecuente asociado a resistencia al tratamiento con inhibidores de la tirosina kinasa (ITK) es la presencia de mutaciones en el dominio kinasa (DK) del gen ABL1. Objetivo: identificar las mutaciones del DK mediante dos metodologías con diferente sensibilidad y correlacionarlas con los niveles de transcriptos BCR-ABL1 en pacientes con falta o pérdida de respuesta hematológica y/o citogenética al tratamiento con ITKs. Metodología: Entre los años 2010-2012 ingresaron 66 pacientes (31 varones/35 mujeres, edad media 50 años, rango: 12-80 años): 63  en fase crónica (FC), 2 en fase acelerada y 1 en crisis blástica. Se evaluó el nivel de transcriptos BCR-ABL1 mediante la técnica de PCR cuantitativa (QRT-PCR) y el screening e identificación de las mutaciones se realizó aplicando High Resolution Melting (HRM) y secuenciación directa. Resultados y Discusión: Se identificaron 16/66 pacientes (24,24%) con mutaciones, de los cuales: 13, 2 y 1 casos presentaron 1, 2 y 3 mutaciones respectivamente. De los 16 casos: 5 estaban en tratamiento con Imatinib, 10 con Dasatinib y 1 con Nilotinib. Respecto al nivel de transcriptos BCR/ABL1 detectamos una reducción < 1 log en 11/16 casos, ³ 1 log en 3/16 y ³ 2 log en 2/16. Los 16 casos presentaron un perfil de HRM compatible con un cambio nucleotídico mientras que por secuenciación directa se detectaron 14/16 con mutaciones en P-loop: M244V, Q252H, E255K, E255Q; en ATP-binding/SH2-contact: V299L, T315I, F317L, L324M, Y326H, S348L, E355G, F359I y en A-loop: L384M y A399T. La investigación de los 2 casos negativos por secuenciación y positivos por HRM (realizando un estudio de PCR alelo específica-ASO) demostraron la presencia de las mutaciones: V299L y F359V en un 10% y 1,17% respectivamente. Si bien la respuesta molecular fue nula en ambos casos el porcentaje de clon mutado fue bajo, lo cual indicaría que éste no tendría una ventaja proliferativa y que la resistencia podría deberse a otro mecanismo involucrado. Las restantes mutaciones se identificaron en alto porcentaje, lo cual se correlacionó en la mayoría de los casos con respuesta molecular nula o minima. En estos casos la resistencia adquirida se debería fundamentalmente a la presencia de dichas mutaciones. La incidencia de las mutaciones detectadas coincidió con los datos de la literatura, excepto por las mutaciones L324M y E255Q, las cuales no han sido reportadas hasta el momento. Conclusiones: La utilización de la técnica HRM/PCR-ASO aumentó la detección de clones mutados debido a su mayor sensibilidad. La correlación de los niveles de transcriptos BCR-ABL1 totales respecto de los mutados permitiría definir la causa de la resistencia, contribuyendo al replanteo de la estrategia terapéutica a seguir.