Generación de un nuevo inmunógeno contra la toxina Shiga tipo II (Stx2) con alta capacidad neutralizante.

MARÍA PILAR MEJIAS; GISELLE GHERSI; CECILIA ANALIA PANEK; ROMINA JIMENA FERNÁNDEZ-BRANDO; VANESA ZYLBERMAN; FERNANDO GOLDBAUM; MARINA SANDRA PALERMO

San Miguel de Tucumán, Tucumán.

Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI-2011); 2011

Sociedad Argentina de Inmunología

La infección con bacterias productoras de Stx2 es un serio problema de salud pública, ya que produce colitis hemorrágica y Síndrome Urémico Hemolítico (SUH). La Stx2 está formada por una subunidad A tóxica y un pentámero de subunidades B (Stx2B) de unión al receptor. Nuestro objetivo fue la generación de un inmunógeno capaz de inducir una respuesta humoral protectora contra Stx2. Para ello, Stx2B se fusionó a un carrier proteico decamérico con capacidades adyuvantes (la proteína resultante se llamó Quimera). La secuencia codificante de stx2b se clonó upstream del carrier en el vector pET11-a, fusionado por un linker de 10 aminoácidos. Esta construcción se utilizó para la expresión y purificación de la proteína. La Quimera fue subclonada en el vector pCI-neo para utilizar como vacuna a DNA. Ratones BALB/c se inmunizaron con: A) 3 dosis de la Quimera en adyuvante de Freund (20µg Stx2B/dosis, i.p.) y B) un protocolo prime boost: 3 dosis del plásmido vacunal (100µg/dosis, i.m.) y un boost de la proteína (20ug Stx2B,i.p.) con Adyuvante de Freund. Título de IgG anti-Stx2B en suero a los 60 días (X±DS): A) n=6;124604±47679**; B) n=4; 6910±5933 (**P<0.005 t-test). Capacidad neutralizante in vitro sobre células Vero. Título (dilución que neutralizó 1CD50 de Stx2) A): 2134±1280*; B): 202±183 (*P<0.05 t-test). Luego, se inocularon ratones con 1 LD100 de Stx2 pre-incubada con sueros preinmunes (control) y de ratones inmunizados grupos A y B. Control (dilución suero, n): (1/50,4) 100% muertos a 96 hs; Grupos A) (1/1000,4) y B) (1/100,4) 0% muertos (P<0.01 Log-Rank test). Finalmente, se obtuvo un 100% de sobrevida al desafiar los animales inmunizados con 1 LD100 de Stx2 a 50 días de la última dosis (P<0.01 Log-Rank test). Debido a la gran capacidad neutralizante de los sueros de los animales inmunizados, concluimos que el nuevo inmunógeno es un prometedor candidato no sólo para el desarrollo de una vacuna contra el SUH, sino también para la generación de anticuerpos terapéuticos.