ININFA   02677
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES FARMACOLOGICAS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Análisis de la especificidad de anticuerpos comerciales anti-receptor MAS
Autor/es:
BURGHI V; CERVINO I; MAZZIOTA L; ECHEVERRIA E; FERNANDEZ NC; DOMINICI FP; MUÑOZ MC
Lugar:
Mar del PLata
Reunión:
Congreso; LX Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2015
Institución organizadora:
SAIC
Resumen:
Enlos últimos años se ha incrementado el número de publicaciones que basan sushallazgos en la utilización de anticuerpos cuya especificidad no ha sidovalidada. Esta observación es principalmente notoria en el caso de estudios acerca de proteínas que seexpresan en bajos niveles, como  losreceptores acoplados a proteínas G (GPCRs). Nuestro grupo estudia el sistemarenina angiotensina (SRA), particularmente el eje que involucra a la enzimaconvertidora de angiotensina de tipo 2, la angiotensina (1-7) y el receptor Mas(MasR). Dicho receptor pertenece a lafamilia de GPCRs, está constituído por 324 aminoácidos, con un masamolecular estimada de 37 kDa y esespecífico para la angiotensina-(1-7). El objetivo de este estudiofue determinar la especificidad de anticuerposcomerciales anti MasR, siguiendouna serie de criterios de especificidad establecidos para una adecuada validaciónde dichos anticuerpos. Para ello, utilizando anticuerpos comerciales dirigidoscontra diferentes epitopes del MasR, se sometieron dos sistemas de expresióndel MasR a las técnicas de Western Blotting (WB) e inmunocitofluorescencia (ICF).MedianteWB y RT-PCR, se investigó lapresencia del MasR en corazón y riñón de ratones normales. Elpatrón de bandas detectado fue idéntico al obtenido por análisis de tejidos de ratonesque no expresan el MasR (MasR-KO). A suvez la intensidadde las bandas obtenidas mediante WB en solubilizados de células HEK293 en las que se sobreexpresó el myc-MasR nocorrelacionó con los diferentes niveles de expresión de dicho receptor.Finalmente, en estas células, al analizar la presencia del MasR mediante ICF utilizandolos anticuerpos anti MasR se observaron patrones de expresión diferentes a losque se obtuvieron con un anticuerpo anti-myc. Se concluye que losanticuerpos comerciales anti-MasR utilizados con mayor frecuencia, no cumplencon los principales criterios de especificidad establecidos y su utilizaciónpuede conducir a conclusiones erróneas.