Exclusión de AMPc en células leucémicas promonocíticas humanas U937

COPSEL, S; FERNANDEZ. N; SHAYO, C; DAVIO, C

Mar del Plata

Congreso; LI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica.; 2006

SAIC

Numerosas señales extracelulares asociadas a receptores acoplados a proteína G (GPCR) convergen en la producción de AMPc, existiendo una fina regulación a distintos niveles a fin de lograr especificidad de la señal. En los últimos años, se ha descripto la exclusión del AMPc intracelular en eucariotas inferiores y en ciertos modelos de eucariotas superiores. La exclusión del AMPc podría cumplir un papel importante en la regulación de los niveles de AMPc intracelulares (AMPci). En este trabajo, nos planteamos como objetivo determinar si el AMPci es capaz de ser excluído de las células promonocíticas humanas U937 y evaluar las variables que determinan dicho proceso. Estas células presentan en su superficie receptores a histamina H2 y receptores ß adrenérgicos acoplados a la vía del AMPc. Cinéticas de producción de AMPc inducidas por 10 μM amtamina (Ago H2), 10 μM isoproterenol (Ago ß) o 75 uM forskolina (activador directo de AC) muestran que dicho nucleótido comienza su exclusión a partir de los 10 min de tratamiento. Por ensayos de cinética de producción de AMPc con distintas concentraciones de amtamina, se determinó que la exclusión es dependiente de los niveles alcanzados intracelularmente por este mensajero. Finalmente, mediante ensayos concentración-respuesta con amtamina, luego de distintos tiempos de estímulo determinamos que este proceso es además tiempo dependiente, observando un máximo de exclusión luego de 120 min de tratamiento (Rmáx extracelular= 133.4±4.3 pmol/1e6 cel; pCE50=5.88±0.07 n=3). Estos resultados indican la presencia de un novedoso mecanismo como parte de la estricta regulación de la señal del AMPc, dependiente del tiempo post-estimulación y de la concentración intracelular de este mensajero e independiente del agente que module dichas concentraciones intracelulares.