Caracterización de dos mutantes en F424 del receptor H1 a histamina. Estudio de la interferencia en la señalización de otro receptor que transluce su señal a través de la misma vía

ZAPPIA C; GRANJA GALEANO G; . COPSEL SABRINA, FERNANDEZ NATALIA, SHAYO CARINA C, DAVIO CARLOS A.; FABIAN L; TUBIO MR; SHAYO C; DAVIO C; MONCZOR F

Mar del Plata

Congreso; LV Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC), Reunión de la Sociedad Argentina de Fisiología y XLII Reunión de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; 2010

SAIC

El receptor H1 a histamina (rH1) es un receptor acoplado a proteína G (GPCR) y señaliza a través de la proteína Gq. Hemos descripto que el rH1 puede adquirir una conformación inactiva que secuestra proteína G e interfiere en la señalización de  otrosGPCRs que transducen a través de la misma vía. Otros autores observaron que mutantes en la fenilalanina 303 del dominio TM6 del receptor á1b adrenérgico coinmunoprecipitan con la proteína G en forma inactiva. Mediante estudios de alineación determinamos que la F303 esta conservada en la mayoría de los GPCRs, siendo la F424 el homólogo para el rH1. El objetivo del presente trabajo es evaluar el efecto de mutar este residuo sobre la funcionalidad del rH1. Estimamos las interacciones que presenta F424 a través del modelado por homología con la estructura del receptor b2 adrenérgico, utilizando el servicio SwissModel y posterior minimización con el programa NAMD. Dado que el anillo aromático de la F424 posee interacciones C-C con I420, T428, N460, N464, L69, S114, e I115, evaluamos el efecto de eliminarlo o reemplazarlo por un residuo hidrofílico al mutar F por A y por S. En el primer caso se pierden dichas interacciones y en el segundo, además se gana un enlace puente de hidrógeno con el carbonilo de M421. En base a esto, realizamos dichas mutaciones en el rH1 y evaluamos en células HEK293T transfectadas la capacidad de las mutantes de interferir en la señalización de otro GPCR que utiliza la misma vía de transducción. Al evaluar la acumulación de Ca2+ intracelular en respuesta a distintas concentraciones de ATP, observamos que la presencia de las mutantes F424A y F424S y no del rH1 salvaje, reducen en un 30% y en un 50% respectivamente la respuesta del rATP sin modificar su CE50 (pCE50=5,8±0,1). Estos resultados sugieren que las mutaciones realizadas sobre el rH1 podrían inducir espontáneamente una conformación del receptor capaz de secuestrar Gq e interferir en la respuesta de otros GPCRs que señalicen por la misma vía