Desarrollo de nuevos prototipos farmacológicos para el tratamiento de la leucemia humana: Estudio del mecanismo molecular pro-apoptóticos de 7-8-dihidroxi-4-metilcumarina

ALONSO E; VAZQUEZ R; GOMEZ N; SHAYO C; DAVIO C

Mar del Plata

Congreso; LV Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC), Reunión de la Sociedad Argentina de Fisiología y XLII Reunión de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; 2010

SAIC

Muchas células cancerígenas son capaces de evadir la apoptosis logrando sobrevivir, a pesar de haber sufrido transformaciones genéticas y morfológicas. Por esta razón la inducción de apoptosis es un enfoque importante para la terapia contra el cáncer. Previamente hemos descrito que la 7,8-dihidroxi-4-metilcumarina (DHMC) induce apoptosis en la línea celular promonocítica U937 mediada por la activación de la vía JNKs y la inhibición de las vías ERK1/2 y PI3K/Akt, pero las bases moleculares que subyacen al mecanismo de muerte celular programada son aún desconocidos. El presente estudio se centra en dilucidar la vía apoptótica implicada en la muerte celular inducida por DHMC en células leucémicas U937. El tratamiento con DHMC (250 μM) provocó la activación proteolítica de la caspasa-9 a las 6 hs (Western Blot), característico de la activación de la vía intrínseca. Confirmando la participación de caspasa-9 en el proceso apoptótico, el pretratamiento con inhibidores específicos de caspasa 9 disminuyeron la actividad de caspasa 3 en un 66% (ensayo colorimétrico en placa). Además, la expresión de las proteínas anti-apoptóticas de la familia Bcl-2, Bcl-2 y Bcl-XL se mantienen sin cambios en respuesta a DHMC (Western Blot). Los niveles de radicales libres de oxígeno (ROS) intracelulares aumentan a partir de 1 hora de tratamiento (fluorescencia con DFC-DA) mientras que los de anión superóxido lo hacen a partir de las 6 h (Citometría con DHE). El pretratamiento con el antioxidante N-acetil-L-cisteína 1 mM retrasó el incremento de ROS por más de 6 hs. Asimismo, las células tratadas con DHMC experimentan una disminución del potencial de membrana mitocondrial a las 14 hs (Citometría con DiOC6). Estos resultados demuestran que el efecto pro-apoptótico de DHMC en la línea celular U937 está mediada por la vía intrínseca de apoptosis