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La angiogénesis consiste en la proliferación de células endoteliales preexistentes a través de subsecuentes brotes, ramificaciones y reorganizaciones, para formar nuevos vasos sanguíneos. En el adulto, la angiogénesis es infrecuente en condiciones fisiológicas y el endotelio de la mayoría de los tejidos es una población estable y de baja tasa mitótica. Debido a que el ovario es uno de los pocos órganos del adulto que presenta un alto grado de angiogénesis a intervalos regulares, se ha propuesto a dicho órgano como modelo para el estudio la angiogénesis en general. La adquisición de un adecuado aporte sanguíneo es posiblemente un paso limitante en la selección y maduración del folículo dominante. Por otro lado, la degeneración del lecho capilar en folículos que no lograron desarrollarse es un factor relevante causante de atresia. Tanto el folículo ovárico como el cuerpo lúteo producen diversos factores angiogénicos. Entre ellos el Factor de Crecimiento del Endotelio vascular (VEGFA) es un potente factor mitogénico y estimulante de la migración de células endoteliales. En cambio la angiopoyetina 1 (ANPT1) es incapaz de estimular la proliferación de células endoteliales pero es indispensable en el reclutamiento de células peri-vasculares lo que permite la maduración y estabilización de los vasos recién formados. Los objetivos de este trabajo fueron 1) estudiar si el VEGFA y las Angiopoyetinas juegan un papel crítico en la supervivencia celular necesaria para el desarrollo folicular dependiente de gonadotrofinas, 2) examinar si el efecto de VEGF es directo sobre la supervivencia de las células foliculares y cual es la vía de transducción de señales involucrada y 3) estudiar el papel de análogos de GnRH sobre la angiogénesis ovárica. 1) Hemos examinado el efecto de la administración local de un inhibidor de la acción de VEGFA (Trap) y de un anticuerpo anti Angiopoyetina-1 en el desarrollo folicular, la apoptosis y la expresión de proteínas de la familia de BCL2 (BAX, BCL2 y BCLX), FAS y FASL en folículos ováricos de ratas prepúberes tratadas con gonadotrofina coriónica equina (eCG). La administración intrabursa de 0,5 ug de Trap por ovario no produjo cambios en el número de folículos preantrales ni antrales tempranos, mientras que disminuyó significativamente el número de folículos periovulatorios y aumentó el número de folículos atrésicos, 48 hs post inyección. Se realizó la técnica de TUNEL sobre secciones de ovario para cuantificar el número de células que presentan fragmentación apoptótica del ADN. El tratamiento con Trap produjo un incremento al doble en el número de células apoptóticas en folículos antrales tempranos. Por otra parte, el ADN aislado de folículos antrales incubados 24 hs en medio libre de suero exhibió el patrón de fragmentación característico de la apoptosis. Los folículos aislados de ovarios tratados con Trap mostraron un aumento significativo en la fragmentación apoptótica espontánea del ADN. Por otra parte, la inyección de Trap produjo un aumento significativo de los niveles de BAX y disminuyó los niveles de BCL2. La relación BCLXL/BCLXs disminuyó significativamente en los folículos obtenidos de ovarios tratados con Trap. No se observaron cambios en los niveles de FAS y FASL luego del tratamiento. La administración intrabursa de 10 ng de un anticuerpo anti Angiopoyetina 1 produjo resultados semejantes a los observados al inhibir la acción de VEGF con Trap. Estos resultados demuestran que la inhibición de VEGFA o de ANPT1 produce un aumento de la apoptosis ovárica a través de un desbalance en el cociente de proteínas antiapoptóticas: proapoptóticas, conduciendo a un mayor número de folículos a la atresia. 2) Se realizaron experimentos in vitro para los cuales se inyectaron ratas prepúberes con DES (dietilestilbestrol) durante tres días consecutivos. Se aislaron folículos antrales por microdisección y se incubaron en ausencia de estímulos (Basal) o en presencia de FSH (20ng/ml) o VEGFA (50ng/ml o 100 ng/ml). Se extrajeron proteínas para la realización de Western blot de las proteínas PCNA, caspasa-3, Erk ½ y Erk ½ fosforilado, Akt, Akt fosforilado, Bad y Bad fosforilado. Además se extrajo ADN para medir su fragmentación en geles de agarosa. En los folículos incubados en presencia de VEGFA se observó un aumento significativo en el contenido de la proteína PCNA respecto a los folículos incubados en ausencia de estímulos. Tanto FSH como VEGFA50 (50ng/ml) diminuyeron significativamente el clivaje de caspasa-3 comparado a folículos incubados en condiciones basales. Además, FSH y VEGFA disminuyeron significativamente la fragmentación apoptótica de ADN respecto a las condiciones basales de incubación y VEGFA aumentó los niveles fosforilados de Erk ½, Akt y Bad. Estos resultados demuestran que VEGFA es un factor de supervivencia en folículos ováricos de rata, produciendo un aumento en la proliferación de las células foliculares y una disminución de la apoptosis. Los resultados indican que la vía Erk ½ y PI3K/Akt están involucradas en su mecanismo de acción. 3) Previamente, en nuestro laboratorio, se observó que la administración de un agonista de GnRH, acetato de leuprolide (LA) causaba una disminución significativa en los niveles proteicos de VEGF, su receptor Flk-1 y de ANGPT-1 en ratas estimuladas con gonadotrofinas. En base a estos resultados analizamos el efecto in vivo de LA en un modelo de Síndrome de Hiperestimulación Ovárica (OHSS) desarrollado en roedor sobre la esteroidogénesis, el desarrollo folicular y formación del cuerpo lúteo (CL), la apoptosis ovárica y la expresión de VEGF. El OHSS es una complicación iatrogénica ocasionada por la inducción de la ovulación en tratamientos de fertilización asistida, que involucra una sobreproducción de hormonas esteroideas y sustancias vasoactivas como el VEGF. Estos factores contribuyen al aumento de permeabilidad vascular y a la formación de quistes ováricos. En este estudio se utilizaron ratas hembras prepúberes y se dividieron en 3 grupos. El grupo control fue inyectado con PMSG (10 UI) y luego de 48 hs con hCG (10 UI) para inducir la ovulación. El grupo OHSS fue inyectado con altas dosis de PMSG (50 UI/día) durante 4 días y luego de 24 hs se le inyectó hCG (25 UI). El grupo OHSS+LA recibió además LA (100 μg/kg/día) desde el primer día de PMSG y luego de 24 hs de la última inyección, se inyectó hCG (25 UI). Las ratas de sacrificaron 48 hs después de la inyección de hCG. Se observó un aumento de la progesterona y el estradiol sérico en el grupo OHSS con respecto al grupo control y el LA disminuyó los niveles de estos esteroides. En cortes histológicos en el grupo OHSS+LA hubo un aumento en el % de folículos antrales tempranos respecto al grupo OHSS). Además, en el grupo OHSS+LA se observó una disminución en el % de CL en formación (CLf) respecto al grupo OHSS. En el grupo OHSS+LA se observó un aumento de células apoptóticas (TUNEL) en los CLf con respecto al grupo OHSS. Mediante IHQ, se observó una disminución de la intensidad para VEGF en el grupo OHSS+LA comparado al grupo OHSS y una disminución de la estabilidad vascular. Además, la expresión de los factores angiogénicos VEGF y ANGPT-1, y de sus receptores Flk-1 y Tie-2, respectivamente se encontraron reducidos luego del tratamiento con LA. Por lo tanto, estos resultados demuestran que el LA en el modelo OHSS actúa sobre el ovario afectando el desarrollo folicular y del cuerpo lúteo, disminuyendo los niveles de los principales factores angiogénicos, afectando de esta manera la estabilidad vascular de los cuerpos lúteos y, por consiguiente, llevándolos a la regresión. Por lo cual sugerimos, que la administración continua de LA durante la estimulación con gonadotrofinas hasta el día de la inducción de la ovulación en pacientes sometidos a FIV, podría reducir la permeabilidad vascular que lleva a la presencia de ascitis y, por consiguiente, el riesgo de contraer OHSS en estas pacientes.