Cáncer de mama y metástasis en cerebro: modelos murinos para ensayos de tratamientos combinados que incrementen el ingreso de las drogas al cerebro

VERÓNICA DE LA FUENTE; OSVALDO PODHAJCER; AYELEN RUBIN; EDGARDO SALVATIERRA; PAOLA ROJAS; SILVIA VANZULLI; CLAUDIA LANARI

Buenos Aires

Jornada; XXXI Jornadas Multidisciplinarias de Oncología del Instituto Roffo; 2016

Objetivo general:-Obtener modelos experimentales adecuados de metástasis cerebrales de cáncer de mama, que permitan evaluar el efecto de terapias combinadas entre quimioterápicos y mifepristona (MFP), antiprogestágeno que incrementaría el pasaje de las drogas a través de la barrera hematoencefálica. Objetivos particulares: -Establecer un modelo de crecimiento intracraneano con el tumor C4-2-HI del modelo murino de cáncer de mama inducido por medroxiprogesterona (MPA) que es resistente a la MFP. -Utilizando una línea celular humana triple negativa insensible a la MFP que metastatiza en cerebro, explorar distintas vías de inoculación de la misma para el estudio del efecto de drogas en metástasis cerebrales: inyección intracardíaca (i.c), subcutánea (s.c) e intracraneana (i.crl). Materiales y métodos:Se utilizó la línea celular MDA-MB-231-BrM2 (MDA) que expresa GFP y luciferasa para los tres modelos planteados y el tumor murino hormono resistente C4-2-HI para el modelo intracraneal. Se utilizaron ratones de las cepas NSG, BALB/c y BALB/c-GFP de tres meses de edad. Inyección subcutánea: 2x106células en 200 ul de solución fisiológica (SF) sc en el flanco derecho de ratones NSG. Inyección intracardíaca: 1x106 células en 100 ul de SF en el segundo espacio intercostal del pecho del ratón. Inyección intracranial con estereotáxico: 2x 105 células en 2 ul de SF en el hipocampo derecho con aguja Hamilton a una velocidad de 0.2 ul/min y una profundidad de 0,27mm. En el caso del modelo murino las células se disgregaron enzimáticamente y se realizó decantación diferencial para separar fibroblastos estromales.Todos los procedimientos utilizados fueron aprobados por el CICUAL del IByME.Resultados:Modelo C4-2-HI: Los ratones inyectados presentaron tumores macroscópicos a los 15 post inyección (dpi) demostrando que hay crecimiento tumoral a tiempos menores. A los 30 dpi los ratones fueron sacrificados debido a deficiencias en el control motor. El uso de ratones BALB/c?GFP permitió delimitar por microscopía de fluorescencia el tumor del tejido nervioso circundante.Células MDA: Inyección intracardíaca: A los 12 dpi se observaron metástasis en pulmón mediante el seguimiento por bioluminiscencia. Las metástasis en cerebro se observaron por H-E a los 22 dpi. Los experimentos se terminaron a los 28 días obteniendo metástasis en cerebro en el 30% de los ratones. Inyección subcutánea: A los 55 dpi se observaron tumores en cerebro por H-E. Por bioluminiscencia in vivo se observaron metástasis en hígado y pulmón y tumores cerebrales ex vivo a los 64 dpi obteniendo un 82% de ratones con tumores en cerebro. Inyección intracraneana: A los 6 dpi ya se pudieron detectar células tumorales GFP positivas por citometría de flujo y luminómetro (Luciferasa) con la ventaja de que no se observaron tumores macroscópicos en otros órganos. ConclusionesSi bien el modelo de metástasis espontáneas sería el más apropiado para el estudio de metástasis cerebrales, el desarrollo de focos en diversos órganos vitales con antelación al desarrollo de las metástasis cerebrales interferiría con el análisis de los resultados. Con el modelo intracardíaco se acortan los tiempos de estudio pero las dificultades serían similares. El modelo intracraneano sería el de elección teniendo la ventaja de que se podrían utilizar diversas líneas celulares, aún las que no desarrollan metástasis espontáneas en cerebro, como es el caso del tumor C4-2-HI y luego se podrían validar los resultados con experimentos seleccionados con la línea MDA inoculada en sc.