Inhibicion de la internalizacion de pseudovirus de Fiebres Hemorragicas Sudamericanas en presencia de plasma de pacientes de Fiebre Hemorragica Argentina

PAYÉS C.; BRIGGILER A.; HELGUERA G.; BARRIONUEVO E.; MAFFÍA P.; LEVIS S.; ENRIA D.

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología; 2016

Asociacion Argentina de Microbiologia (AAM)

El virus Junín (JUNV) es el agente etiológico de la Fiebre Hemorrágica Argentina (FHA) y forma parte de la clase B de los Arenavirus deSudamérica. Pertenecen también a este grupo los virus Machupo (MACV), Chapare (CHPV), Guanarito (GTOV) y Sabiá (SABV), y producen lasFiebres Hemorrágicas Sudamericanas (FHS). La entrada de estos Arenavirus a las células del paciente ocurre vía endocitosis mediada por elreceptor de transferrina 1 humano (hTfR1). El virus expresa en su superficie una glicoproteína (GP1) que se une específicamente al dominioextracelular del hTfR1. En la actualidad, en ausencia de otra terapia médica fiable el único tratamiento eficaz contra la FHA consiste en lainmunoterapia pasiva con el plasma de pacientes convalecientes de FHA (PCFHA). Para el resto de las FHS no existe tratamiento equivalente. Elobjetivo de este trabajo es evaluar el efecto del PCFHA sobre la internalización de pseudovirus de FHA y las demás FHS. En primer lugar, segeneraron pseudovirus de JUNV, MACV, CHAV, GTOV y SABV en células HEK‐293T. Estos pseudovirus se componen de la cápside viral gag/poldel virus no‐replicante de la leucemia murina, un vector retroviral para la expresión de GFP (Green Fluorescent Protein) y están decorados conlas GP1 y 2 de cada uno de los virus. En este sistema, las glicoproteínas en los pseudovirus interaccionan con TfR1 de la membrana celular y lospseudovirus son internalizados induciendo la expresión de GFP. Se trataron células HEK‐293T con diluciones 1:10, 1:100, 1:1.000, 1:10.000 y1:100.000 de PCFHA con título 10240 ó 0 de anticuerpos neutralizantes (alto y cero título, respectivamente), luego de 30 min se adicionaron lospseudovirus, se incubó 16 hs y se lavó. A las 48 hs luego del tratamiento, las células fueron levantadas con tripsina y fijadas con 2% deformaldehido. El porcentaje de células que expresaron GFP fue cuantificado por citometría de flujo. Se observó que el tratamiento con PCFHAde alto título previene hasta 97% la entrada de pseudovirus de JUNV, con valores significativos en diluciones hasta 1:10.000. Sin embargo, ladilución 1:10 del PCFHA cero título resultó en una inhibición de la internalización del 70%. En el caso de GTOV, CHAV y SABV aunque se vieronniveles de inhibición significativa en 1:10 de PCFHA, los plasmas de alto y cero títulos dieron perfiles de inhibición similares. Esto sugiere que lainhibición de internalización podría estar dada por otros factores independientes de los anticuerpos neutralizantes contra JUNV presentes en elplasma. En contraste, para MACV los niveles de inhibición de internalización en la dilución 1:10 fueron 3 veces mayor para el PCFHA alto títulocon respecto al de cero título. En conjunto estos resultados sugieren que los anticuerpos neutralizantes en el PCFHA previenen la internalizaciónde JUNV con alta eficiencia y parcialmente la de MACV; pero no la de los otros arenavirus responsables de las FHS.