Caracterización del módulo RCCX en una muestra de pacientes argentinos con Deficiencia de 21-Hidroxilasa

FERNANDEZ C; BUZZALINO N; ONETO A; STIVEL M; BELLI S; PASQUALINI T; CHARREAU E; ALBA L; DAIN L

Gramado, Brasil

Congreso; XX Congresso Brasileiro de Genética Médica; 2008

Sociedade Brasileira de Genética Médica

El 90% de los casos de Hiperplasia Suprarrenal Congénita se deben a alteraciones en la enzima 21 hidroxilasa, siendo esta la enfermedad autosómica recesiva de mayor frecuencia. La enzima es codificada por el gen CYP21A2, ubicado en el módulo RCCX, compuesto por los genes RP1, C4, CYP21 y TNX. En humanos, el módulo se encuentra generalmente duplicado en tandem. Los cromosomas poseen, por lo tanto, 2 genes C4, un gen CYP21A2 y un pseudogen CYP21A1P con 98% de identidad de secuencia. En un trabajo previo estudiamos las 10 mutaciones puntuales más frecuentes del gen en una muestra de afectados de nuestra población mediante PCR. En este trabajo nos propusimos discriminar entre la presencia de mutaciones en homocigosis, deleciones y/o macroconversiones así como caracterizar en detalle la composición modular del bloque RCCX. De un total de 300 pacientes, se realizó Southern-blot en una muestra de 92 pacientes y 26 familiares. El ADN genómico fue digerido con Taq I y Bgl II y las membranas hibridizadas con sondas para los genes CYP21A1/2, TNXA/B y C4A/B. El análisis de los resultados permitió discriminar entre homocigosis, deleción o macroconversión en 102 de las muestras estudiadas, que corresponden a 185 alelos no relacionados. Se caracterizó el módulo RCCX en 169/185 (91%). Los haplotipos hallados fueron: 25 alelos monomodulares: 4 por deleción del módulo que contiene al gen y 21 por  deleción del módulo del pseudogen, de los cuales 4 poseen macroconversiones; 90 alelos bimodulares: 9 poseen macroconversiones y 54 trimodulares por duplicación del módulo del pseudogen: al menos 38 poseen la mutación V281L y 4 poseen macroconversiones. La utilización de 2 enzimas de restricción y 3 sondas nos ha permitido una caracterización más precisa de la estructura molecular de este complejo locus. Con el objetivo de resolver la totalidad de los alelos estudiados, nos encontramos actualmente abocados a la puesta a punto de la técnica de  MLPA.