La exposición de espermatozoides humanos capacitados al fluído peritoneal modifica su respuesta ante inductores de reacción acrosoma

MUNUCE MJ; CAILLE A; BERTA C; CUASNICÚ PS

San Pablo, Brasil

Congreso; XXI Reunión Bienal Asociación Latinoamericana de Investigadores en Reproduccion Humana (ALIRH); 2009

Asociación Latinoamericana de Investigadores en Reproduccion Humana (ALIRH)

Justificativa: El microambiente donde tiene lugar la fecundación esta compuesto por la secreción tubaria, el fluido peritoneal (hFP) que ingresa desde el peritoneo y el fluido folicular (hFF) que acompaña al ovocito. La exposición de espermatozoides capacitados al hFP previene la ocurrencia de la reacción acrosomal (RA) inducida, así como la capacidad de unirse a la zona pelúcida del ovocito. Objetivos: Analizar el mecanismo involucrado en la inhibición de la RA cuando espermatozoides humanos son expuestos al hFP previo a ser estimulados por inductores fisiológicos de RA. Métodos: Los hFPs fueron obtenidos laparoscópicamente en estadio periovulatorio (16.7±0.6 días) de pacientes estériles sin causa (n=13). El pool de hFF se obtuvo de pacientes que realizaban FIV (n=6). Se determinó la concentración de progesterona (P) en el hFP y en el hFF por ELISA. Una solución de P (mg/ml) se utilizó para suplementar al hFP (a concentraciones comparables al hFF). Los espermatozoides móviles de 20 semenes normozoospérmicos (según OMS y Kruger) fueron capacitados 22 h en HTF suplementado con 35 mg/ml de BSA. Los espermatozoides capacitados fueron expuestos al 20% hFP (5, 15, 30 ó 60 min.) e inducida la RA con 20% hFF. Se comparó la actividad inductora de RA de hFF, P, hFP y hPF suplementado con P. Se evaluó la RA inducida con hFF o P en espermatozoides, luego de ser incubados 60 min con 20% hFP. Además, el hFP fue removido por lavado o digerido con proteinasa K, luego de lo cual se evaluó su efecto sobre RA inducida. La RA se determinó mediante la técnica de Pisum sativum. Los datos expresados como media±ES fueron analizados por ANOVA y Tukey-Kramer, considerando significativo un p<0.05. Resultados: El hFP no tiene capacidad para inducir RA y necesita 60 min. de incubación con los espermatozoides para inhibir 100% el estímulo de RA del hFF (p<0,001). La capacidad inductora de RA del hFF fue semejante a la solución de P y fue utilizado indistintamente. Al ser suplementado con P el hFP estimula la RA respecto de los controles (9,3±1,5 vs 4,2±0,5%; p<0,001). En cambio, si los espermatozoides son tratados previamente 60 min. con el hFP y luego estimulados con hFF o P pierden la capacidad de reaccionar y los valores son similares al medio control. Si bien la remoción del hFP por centrifugación no revierte la respuesta al inductor, la actividad inhibitoria sobre RA desaparece luego de la digestión enzimática y se induce RA respecto a los controles (10±2,1 vs 3,1±1,4%; p<0,05). Conclusiones: Existiría algún factor en el hFP, quizás de naturaleza proteica, que necesitaría un tiempo de interacción con el espermatozoide capacitado para prevenir la acción de P del hFF. Durante el tránsito oviductal el hFP protegería al espermatozoide de perder su acrosoma de forma temprana