Efecto del acetato de ulipristal sobre la capacidad fecundante del espermatozoide humano. Un modelo de estudio in vitro

ZUMOFFEN, C; LUIS BAHAMONDE; MUNUCE MJ; CAILLE, A; COHEN DJ; GOMEZ ELIAS M; CUASNICU, PS

Congreso; XVII Congreso Argentino de Medicina Reproductiva; 2016

SAMER

EFECTO DEL ACETATO DE ULIPRISTAL SOBRE LA CAPACIDAD FECUNDANTEDEL ESPERMATOZOIDE HUMANO. UN MODELO DE ESTUDIO IN VITRO.1Zumoffen C*, 2Gómez Elías M*, 1Caille A, 3Bahamondes L, 2Cuasnicú PS, 2Cohen DJ, 1MunuceMJ.1Laboratorio de Medicina Reproductiva, Facultad de Cs.Bioquímicas y Farmacéuticas, Universidad Nacional de Rosario, Argentina. 2Instituto de Biología y Medicina Experimental(IBYME-CONICET), Buenos Aires, Argentina. 3 Departamento de Obstetricia yGinecología, Escuela de Medicina, Universidad de Campinas (UNICAMP), Campinas,SP, Brasil. * ambos autores contribuyeron equivalentemenete al trabajo.Objetivo: El acetato de ulipristal (UPA) es un modulador selectivo del receptor de progesterona (P)utilizado como anticonceptivo de emergencia (AE). Sibien su principal mecanismo de acción es inhibir la ovulación, aún se conocepoco acerca de sus efectos post-ovulatorios. Nuestroobjetivo fue estudiar in vitro el efecto de UPA sobre la capacidad fecundantedel espermatozoide humano. Diseño: Estudioprospectivo de investigación básica utilizando modelos in vitro.Materialesy Métodos: Oviductos provenientes de pacientes premenopáusicas sometidasa histerectomía por causa benigna fueron fraccionados en explantes (1-2mm3)y luego de 24 h fueron incubados 4 h con 1x105 espermatozoides/ml enpresencia de 0 ó 1 ug/ml de UPA. Mediante microscopía confocal y análisisdigital de las imágenes se determinó en número de espermatozoides unidos/mm2.El estado acrosomal de los espermatozoides en el medio condicionado de losexplantes fue analizado por técnica Pisum sativum. Espermatozoides pretratados con0 ó 1 ug/ml de UPA fueron incubados con complejoscúmulus ovocito de ratón u ovocitos de hámster sin zona pelúcida,determinándose el número de espermatozoidespresentes en el cúmulus, el % de ovocitos fecundados (%F) y el número deespermatozoides fusionados por ovocito. Para evaluar la interacción de UPA conlos sitios de unión de P en el espermatozoide, las células fueron incubadas 18h en presencia de 0-10 ug/ml de UPA y tratados luego con una sonda de P unida aBSA-FITC. La especificidad de dicha unión fue evaluada con una curva de P. Entodos los casos, la localización de la marca fluorescente fue analizada pormicroscopía de epifluorescencia. Los datosse expresan como medias ± SEM analizados por ANOVA y Tukey-Kramer, p<0,05 fue significativo.Resultados:La presencia de 1 ug/ml de UPA no modificó (tratados vs. controles) el númerode espermatozoides unidos/mm2 de explante (510±135 vs. 462±157, n=3), el estado acrosomal (9.6±5.1vs. 7.3±3.3% %, n=3), el número de espermatozoides dentro del cúmulus(13±3 vs 13±3, n=3), el %F (84±5 vs 77±9%, n=4) ni el número de espermatozoidesfusionados por ovocito (1.3 ±0.2 vs. 2±0.3, n=4). Al ser incubados con la sondade P-BSA-FITC, sólo el 35 % de los espermatozoides presentaban marcafluorescente en el capuchón acrosomal o en el segmento ecuatorial. La disminuciónde dicha marca en presencia de 5 ug/ml de P respecto al control (p<0.001, n=3) confirmó laespecificidad de la unión. Cuando los espermatozoides fueron expuestos a UPA yluego a la sonda, fue necesaria una concentración mayor a 1 ug/ml paradesplazar la marca fluorescente respecto alcontrol (p<0.001, n=7). Conclusión:Estos resultados sugieren que la presencia de UPA a concentraciones superioresa las plasmáticas para AE (~0,2 ug/ml), no afectan la capacidad delespermatozoide humado de unirse in vitro al tejido oviductal humano, ni depenetrar el cúmulo y el ovocito heterólogos. Si bien se observa cierta afinidadde UPA por el sitio de unión a P sobre la cabeza delespermatozoide, esto ocurriría a concentraciones superiores a las esperadasdurante AE. Financiadopor BIO 314, UNR, PICT 2011-061 y PIP 2012-905.