SUBFERTILIDAD EN RATONES MACHOS CARENTES DE CRISP1 y CRISP4

CARVAJAL, GUILLERMO; BRUKMAN, NICOLÁS G.; GÓMEZ ELÍAS, MATÍAS D.; WEIGEL MUÑOZ, MARIANA; CUASNICÚ, PATRICIA S.

Lima

Congreso; XXIV REUNIÓN BIENAL DE LA ASOCIACIÓN LATINOAMERICANA DE INVESTIGADORES EN REPRODUCCIÓN HUMANA; 2015

ASOCIACIÓN LATINOAMERICANA DE INVESTIGADORES EN REPRODUCCIÓN HUMANA

INTRODUCCIÓN. CRISP1 y CRISP4 son proteínas epididimarias que se asocian a los espermatozoides durante la maduración y participan en diferentes etapas de la fertilización. Sin embargo, los ratones knockout (KO) para cada proteína son fértiles, sugiriendo la existencia de mecanismos compensatorios entre las mismas. OBJETIVO. Generar ratones deficientes en ambas proteínas y evaluar su fenotipo reproductivo. Dada la disponibilidad de ratones KO para CRISP1 desarrollados por nuestro laboratorio, el objetivo también incluyó la generación y caracterización de una colonia de animales KO para CRISP4. MATERIALES Y MÉTODOS. El fenotipo reproductivo fue evaluado analizando en los espermatozoides: número (por conteo), viabilidad (por tinción con eosina), motilidad (subjetiva), reacción acrosomal (RA) (por tinción con Coomassie Blue), hiperactividad (por CASA), y capacidad de penetrar el cúmulus y fertilizar los ovocitos in vitro e in vivo (mediante tinción de gametas con Hoechst). La fertilidad de los machos fue evaluada por apareo con hembras en estro natural o superovuladas. RESULTADOS. Si bien los machos KO para CRISP4 presentaron normales porcentajes de fertilidad y de fertilización in vivo, sus espermatozoides exhibieron menor capacidad de sufrir la RA inducida por progesterona y de fertilizar complejos cúmulus-ovocito in vitro. El uso de valinomicina revirtió el fenotipo de RA, sugiriendo defectos en la hiperpolarización de la membrana plasmática. Interesantemente, a pesar de la normal fertilidad de los machos de cada colonia individual, los animales dobles KO resultaron subfértiles, y mostraron una menor capacidad fertilizante in vivo. DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES. La ausencia de CRISP1 o CRISP4 en forma individual afecta la capacidad fertilizante de los espermatozoides pero no la fertilidad de los animales. Estos resultados, junto a la subfertilidad observada en los animales carentes de ambas proteínas apoyan la existencia de una cooperación y compensación entre proteínas homologas con el fin de garantizar el éxito de la fertilización.