ASOCIACIÓN NUCLEAR DE ERBB2 Y STAT3 EN EL PROMOTOR DE CICLINA D1: ROL DE ERBB2

W BEGUELIN, CJ PROIETTI, C ROSEMBLIT, MA RIVAS, RP CARNEVALE, V SUNDBLAD, MC DÍAZ FLAQUÉ, M TKACH,EH CHARREAU, R SCHILLACI, PV ELIZALDE.

Mar del Plata 2007

Congreso; Saic 2007; 2007

Saic

ASOCIACIÓN NUCLEAR DE ERBB2 Y STAT3 EN EL PROMOTOR DE CICLINA D1: ROL DE ERBB2 COMO COACTIVADOR EN CÉLULAS DE CÁNCER DE MAMA W Beguelin, CJ Proietti, C Rosemblit, MA Rivas, RP Carnevale, V Sundblad, MC Díaz Flaqué, M Tkach, EH Charreau, R Schillaci, PV Elizalde. Instituto de Biología Y Medicina Experimental Previamente demostramos que la heregulina (HRG) activa Stat3 en cultivos primarios de células C4HD, provenientes de un tumor mamario murino progestágeno dependiente. Por otro lado, encontramos que HRG induce la localización nuclear de ErbB2 y su asociación con Stat3 en extractos totales. En este trabajo estudiamos la localización celular de Stat3 y ErbB2 asociadas y una posible funcionalidad de esta interacción. Mediante inmunofluorescencia y microscopía confocal demostramos que HRG induce la colocalización nuclear de ErbB2 y Stat3 en células C4HD y en la línea de tumor mamario T47D. Ensayos de coinmunoprecipitación con extractos nucleares y citosólicos de células C4HD confirmaron la capacidad de HRG de inducir colocalización nuclear de ErbB2 y Stat3 y evidenciaron que HRG estimula también la asociación física de estas proteínas fosforiladas en el núcleo. Mediante un ensayo de inmunoprecipitación de la cromatina (ChIP) demostramos que HRG induce el reclutamiento de Stat3 y ErbB2 al sitio de unión de Stat3 en el promotor del gen de ciclina D1 (cicD1). Luego evaluamos la capacidad de HRG de regular la expresión de cicD1. Ensayos de Western Blot indicaron que HRG induce la expresión de cicD1 en células C4HD y T47D. La transfección de estas células con un dominante negativo (DN) de Stat3 inhibió la expresión de cicD1 inducida por HRG y, al transfectar con una mutante constitutivamente activa (CA) de Stat3, aumentó la expresión basal. Células C4HD y T47D transfectadas con una construcción del promotor de cicD1–luciferasa y tratadas con HRG mostraron un aumento de la actividad transcripcional de cicD1 y éste fue prevenido por la cotransfección con el DN de Stat3 o una mutante de ErbB2 que no transloca al núcleo. Por el contrario, la cotransfección con Stat3 CA o ErbB2 CA y la sobreexpresión de ErbB2 incrementó la actividad transcripcional basal. Con estos experimentos sugerimos un nuevo rol de ErbB2 como coactivador en el mecanismo de regulación de transcripción por Stat3.