7,8-dihidroxi-4-metilcumarina induce apoptosis modulando distintas vías de señalización en células leucémicas

ME RIVEIRO, R VAZQUEZ, N GOMEZ, A MOGLIONI, A BALDI, C DAVIO, C SHAYO.

Mar del Plata

Congreso; LII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2007

La utilización de agentes pro-apoptóticos es una opción promisoria para el tratamiento de leucemias humanas. Previamente, estudiamos la relación estructura-actividad de hidroxicumarinas, describiendo que los grupos oxidrilos fenólicos libres son necesarios para la actividad apoptótica en la línea celular promonocítica U937. Asimismo, determinamos que la producción de radicales libres estaría implicada en dicha actividad. Con el objetivo de profundizar sobre el mecanismo de acción de la hidroxicumarina 7,8-dihidroxi-4-metilcumarina (DHMC) en la inducción de apoptosis, evaluamos distintas vías de señalización relacionadas a la apoptosis en células hematopoyéticas.DHMC induce apoptosis en U937 y HL60 (líneas leucémicas p53 negativas), en forma dosis y tiempo dependiente, determinado por fragmentación de ADN y tinción nuclear con Hoescht 33342 e ioduro de propidio; presentando mayor citotoxicidad en células leucémicas que en monocitos normales. DHMC 250 μM induce luego de 3 h una disminución de los niveles de pro-caspasa 3 y un incremento de caspasa 3 y de PARP clivada (western blot). Los niveles de c-Myc disminuyen a las 3 h mientras que los de p21WAF1/CIP1se incrementan a las 6 h (western blot). El pretratamiento con el antioxidante N-acetil-L-cisteína retrasó la disminución de los niveles de c-Myc hasta las 24 h. DHMC modula en forma tiempo dependiente la vía de MAPKs y PI3K/Akt., observándose activación de la vía de JNK e inactivación de las vías de ERK y de Akt, sin modificar la vía de p38 (western blot con anticuerpos para las proteínas fosforiladas y totales). Estos resultados indican que DHMC modula las vías de ERK, JNK y Akt, los genes c-myc y p21WAF1/CIP1induciendo apoptosis de manera caspasa dependiente posiblemente debido a generación de radicales libres. La inducción de apoptosis independiente de p53 señala a las hidroxicumarinas como apropiados prototipos farmacológicos para el desarrollo de nuevos agentes para el tratamiento de leucemias.