IBYME   02675
INSTITUTO DE BIOLOGIA Y MEDICINA EXPERIMENTAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
La activación β-adrenérgica induce la diferenciación de células
Autor/es:
GARGIULO L; MAY M; RIVERO E; DAVIO C; LUTHY IA; BRUZZONE A
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2014
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
La glándula mamaria normal
contiene tres tipos de lóbulos (tipo 1, 2 y 3) de acuerdo a su complejidad,
definido por el número de brotes por lóbulo. El completo desarrollo de la mama
se alcanza durante el embarazo y posterior lactancia, donde los lóbulos
progresan del 2 al 3, seguidos de una fase secretoria. Con la progresiva
maduración de los lóbulos, existe una reducción de la susceptibilidad de las
células a la transformación maligna.
En
trabajos anteriores demostramos que la activación de los receptores β-adrenérgicos
con isoproterenol (Iso) induce un fenotipo más benigno en células tumorales y
no tumorales de mama humana (disminución de la proliferación y migración
celular y un aumento de la adhesión). El objetivo de este trabajo fue evaluar
el efecto del Iso sobre la diferenciación de células no tumorales MCF-10A en un
cultivo tridimensional (3D).
Se
sembraron 5000 células/well sobre una capa de Matrigel, y se estimuló durante 2
semanas con los compuestos descriptos en cada caso. Se realizó marcación por inmunofluorescencia
de citoesqueleto y núcleos.
La
incubación con Iso, o con forskolina (compuesto que aumenta los niveles de
intracelulares de AMPc) indujo el desarrollo de lúmenes bien constituidos,
mientras que en los controles son sólidos o con un lumenes incipientes.
En
condiciones control, se observó la presencia de estructuras tubulares
correspondientes a ductos mamarios con ramificaciones secundarias y escasas
terciarias (lób 1 y 2). Se observaron entre 2-6 brotes terminales por cada
estructura secundaria.Por otro lado,frente al tratamiento con Iso y Fk se estimuló
la formación de lóbulos de tipo 3 con gran cantidad de brotes terminales,
observándose mayor tamaño y número con respecto al control. En este caso,
debido a la intensa ramificación, resulta difícil identificar con claridad a
los ductos mamarios.
Para
determinar el posible rol del AMPc extracelular como responsable de la
formación de estas estructuras, se incubaron las células con AMPc, con Probenecid
(agente que bloque la exclusión de AMPc)
y la combinación de ambos. El AMPc extracelular produjo un fenotipo
igual al producido por el Iso o la Fk, mientras que la incubación con el
Probenecid bloqueó la formación de
brotes terminales.
Como
conclusión, la activación β-adrenérgica, posiblemente a través de
la producción y la liberación de AMPc, estaría regulando la diferenciación de
las células de mama humana MCF-10A creciendo en cultivo 3D.