Expresión de Cadherina Epitelial (CadE) en líneas celulares de cáncer de mama IBH-4 e IBH-6.

LAPYCKYJ , VAZQUEZ-LEVIN Y COL. (VER DETALLE EN RESUMEN)

Huerta Grande, Córdoba, Argentina

Congreso; Primera Reunión Conjunta de Sociedades de Biología de la República Argentina; 2007

Sociedades Argentinas de Biología

presentado EXPRESION DE CADHERINA EPITELIAL (CadE) EN LINEAS CELULARES DE CANCER DE MAMA IBH-4 E IBH-6 Lapyckyj L., Matos M.L., Castillo L., Lentz E.M., Gabrielli N., Lüthy I., Vazquez-Levin M.H. Instituto de Biología y Medicina Experimental (CONICET-UBA). Buenos Aires, Argentina. lapyckyj@dna.uba.ar   Introducción: CadE es una proteína de transmembrana de 120 kDa involucrada en la adhesión celular. Las líneas celulares de cáncer de mama humano IBH-4 e IBH-6 son invasivas y presentan una forma de cadE de 89 KDa (cadE89) truncada en el extremo C-terminal. Objetivos: Continuar con la caracterización de la expresión de cadE en células IBH-4 e IBH-6. Métodos: Se realizaron ensayos de Western immunoblotting e  inmunocitoquímica con anticuerpos contra diferentes dominios de cadE. Se estimaron los niveles de cadE por densitometría con rec-cadE como estándar. Se evaluó la expresión de ARNm por RT-PCR. Resultados: En IBH-6 e IBH-4: 1) Los niveles de cadE fueron de un 30 y 10% de los estimados en MCF7 (0,6 ng/mg proteína total) y 2) cadE fue localizada en acúmulos distribuidos en toda la célula. Los cambios no se asociaron a estrés (resultados similares con 10/2/0% SFB). No se detectó acumulación de cadE de 35 KDa. cadE89 no co-migró con el ectodomio de cadE. Los niveles de ARNm de cadE fueron bajos y estudios de mapeo revelaron cambios en su región 3’. Conclusión: Los estudios muestran alteraciones en la expresión de cadE (ARNm y proteína) en las células IBH-4 e IBH-6.   Área temática: Biología Celular y Molecular Sub-área: Bioquímica   Trabajo inédito   a ser publicado en Biocell EXPRESSION OF EPITHELIAL CADHERIN (Ecad) IN HUMAN BREAST CANCER CELL LINES IBH-4 AND IBH-6 Lapyckyj L., Matos M.L., Castillo L., Lentz E.M., Gabrielli N., Lüthy I., Vazquez-Levin M.H. Instituto de Biología y Medicina Experimental (CONICET-UBA). Buenos Aires, Argentina. lapyckyj@dna.uba.ar   Introduction: Ecad is a 120 kDa transmembrane protein involved in cell-cell adhesion. Human breast cancer cell lines IBH-4 and IBH-6 are highly invasive and have a distinct C-term truncated 89 KDa Ecad form (Ecad89). Objective: To further characterize Ecad expression in IBH-4/IBH-6 cell lines. Methods: Protein analysis involved immunocytochemistry and Western immunoblotting with antibodies to different Ecad domains. Protein levels were estimated by densitometry using rec-Ecad as mass standard. mRNA analysis was done by RT-PCR. MCF-7 cells served as control. Results: In IBH-6 and IBH-4 cells: 1) Ecad protein levels decreased to 30% and 10% compared to MCF-7 (0.6 ng/mg cell protein) and 2) Ecad localization was weak and patchy along the cell. Ecad protein changes did not result from culture stress (similar results in cultures with 10/2/0% FCS). No accumulation of 35KDa Ecad was detected, and Ecad89 did not co-migrate with the Ecad ectodomain. Ecad mRNA levels were low in IBH-4 and IBH-6, and mapping studies revealed major changes in its 3’end. Conclusion: significant changes in Ecad expression (mRNA and protein) were found in IBH-4 and IBH-6 cells. EXPRESION DE CADHERINA EPITELIAL (CadE) EN LINEAS CELULARES DE CANCER DE MAMA IBH-4 E IBH-6 Lapyckyj L., Matos M.L., Castillo L., Lentz E.M., Gabrielli N., Lüthy I., Vazquez-Levin M.H. Instituto de Biología y Medicina Experimental (CONICET-UBA). Buenos Aires, Argentina. lapyckyj@dna.uba.ar   Introducción: CadE es una proteína de transmembrana de 120 kDa involucrada en la adhesión celular. Las líneas celulares de cáncer de mama humano IBH-4 e IBH-6 son invasivas y presentan una forma de cadE de 89 KDa (cadE89) truncada en el extremo C-terminal. Objetivos: Continuar con la caracterización de la expresión de cadE en células IBH-4 e IBH-6. Métodos: Se realizaron ensayos de Western immunoblotting e  inmunocitoquímica con anticuerpos contra diferentes dominios de cadE. Se estimaron los niveles de cadE por densitometría con rec-cadE como estándar. Se evaluó la expresión de ARNm por RT-PCR. Resultados: En IBH-6 e IBH-4: 1) Los niveles de cadE fueron de un 30 y 10% de los estimados en MCF7 (0,6 ng/mg proteína total) y 2) cadE fue localizada en acúmulos distribuidos en toda la célula. Los cambios no se asociaron a estrés (resultados similares con 10/2/0% SFB). No se detectó acumulación de cadE de 35 KDa. cadE89 no co-migró con el ectodomio de cadE. Los niveles de ARNm de cadE fueron bajos y estudios de mapeo revelaron cambios en su región 3’. Conclusión: Los estudios muestran alteraciones en la expresión de cadE (ARNm y proteína) en las células IBH-4 e IBH-6.   Área temática: Biología Celular y Molecular Sub-área: Bioquímica   Trabajo inédito   a ser publicado en Biocell EXPRESSION OF EPITHELIAL CADHERIN (Ecad) IN HUMAN BREAST CANCER CELL LINES IBH-4 AND IBH-6 Lapyckyj L., Matos M.L., Castillo L., Lentz E.M., Gabrielli N., Lüthy I., Vazquez-Levin M.H. Instituto de Biología y Medicina Experimental (CONICET-UBA). Buenos Aires, Argentina. lapyckyj@dna.uba.ar   Introduction: Ecad is a 120 kDa transmembrane protein involved in cell-cell adhesion. Human breast cancer cell lines IBH-4 and IBH-6 are highly invasive and have a distinct C-term truncated 89 KDa Ecad form (Ecad89). Objective: To further characterize Ecad expression in IBH-4/IBH-6 cell lines. Methods: Protein analysis involved immunocytochemistry and Western immunoblotting with antibodies to different Ecad domains. Protein levels were estimated by densitometry using rec-Ecad as mass standard. mRNA analysis was done by RT-PCR. MCF-7 cells served as control. Results: In IBH-6 and IBH-4 cells: 1) Ecad protein levels decreased to 30% and 10% compared to MCF-7 (0.6 ng/mg cell protein) and 2) Ecad localization was weak and patchy along the cell. Ecad protein changes did not result from culture stress (similar results in cultures with 10/2/0% FCS). No accumulation of 35KDa Ecad was detected, and Ecad89 did not co-migrate with the Ecad ectodomain. Ecad mRNA levels were low in IBH-4 and IBH-6, and mapping studies revealed major changes in its 3’end. Conclusion: significant changes in Ecad expression (mRNA and protein) were found in IBH-4 and IBH-6 cells.