Estudio de las proteínas FKBP como blanco farmacológico de drogas y compuestos naturales que modulan la respuesta de NF-kappaB

CAMISAY MF, DE LEO S, MAZAIRA G, CAUERHFF A, GALIGNIANA MD, ERLEJMAN AG

Congreso; LIX Reunión Anual de SAIC; 2014

NF-kB regula la expresión de genes involucrados en la inflamación, proliferación celular y apoptosis. Previamente reportamos que proteínas de la familia FKBP (FK506-Binding Protein) modulan la actividad transcripcional de NF-kB, tal que FKBP51 inhibe su activación y su homóloga FKBP52, la estimula. Las FKBPs tienen actividad de peptidil-prolil isomerasa (PPIasa), la cual es inhibida por el macrólido FK506. Aquí estudiamos la relevancia del dominio PPIasa de ambas FKBPs en la modulación de NF-kB. Su actividad transcripcional se evaluó por ensayos de gen reportero en células HEK 293T, y en células BeWo se analizaron efectos biológicos endógenos NF-kB-dependientes como la secreción de IL-6 (por ELISA) y la activación de MMP (por zimografía). En células estimuladas con PMA, la preincubación con FK506 no alteró el efecto inhibitorio de FKBP51, pero bloqueó la estimulación por FKBP52, sugiriendo el requerimiento de la actividad de PPIasa en este caso. Ello fue confirmado por el uso de mutantes puntuales de FKBP52 carentes de actividad PPIasa (FKBP52 F67Y y FKBPP52 F130Y), siendo ello revertido por cotransfección con wtFKBP52. Se sabe que el flavonoide natural epigalocatequina-galato (EGGC) inhibe efectos NF-kB-dependientes, por lo que hipotetizamos que ello podría deberse a la inhibición de FKBP52. La preincubación de las células con EGCG bloqueó el efecto estimulante de FKBP52. Se evaluó entonces la posible presencia de un sitio de unión a EGCG a FKBP52 por modelado molecular con SwissDock (servidor específico para unión proteína-ligando) utilizando las estructuras de FKBP52: 1N1A, 1Q1C, 1QZ2 y 4LAX (Protein Data Bank). Discriminando por parámetros estructurales y estadísticos se predijeron estructuras EGCG-FKBP52 donde el sitio de unión de EGCG involucra a las Phe67 y Phe 130 del sitio activo de FKBP52. Concluimos que el dominio PPIasa de FKBP52 es un nuevo blanco modulatorio de la acción de NF-kB, y proponemos que la acción de EGCG es debida a tal regulación.