Evaluación del estado del acrosoma de espermatozoides equinos

FERRANTE A; BACA CASTEX C; CALDEVILLA M; MARIN BRIGGILER, CI; MIRAGAYA M; VAZQUEZ LEVIN, M

Jornada; IV Jornadas Internacionales del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA); 2014

INITRA

La evaluación del estado del acrosoma es clave en la valoración del potencial funcional espermático. Dentro de las técnicas que evalúan el estado acrosomal (Intacto/Reaccionado), la técnica difundida es la tinción FITC-PNA/PI (PNA) que evalúa el estado del acrosoma (FITC-PNA) y la viabilidad espermática (PI). La tinción con Azul de Coomassie (AC) es sencilla y económica y no está ampliamente descripta en el equino. En este trabajo se realizaron ambas técnicas (PNA y AC) sobre espermatozoides equinos seleccionados, capacitados in vitro e incubados con Progesterona (P4) para inducir la reacción acrosomal y se determinó la correlación (r) entre las evaluaciones. Se analizaron 12 eyaculados de 3 padrillos fértiles. La fracción de espermatozoides móviles se obtuvo por  centrifugación en Androcoll-ETM. Los espermatozoides seleccionados se incubaron en medio MW-BSA por 3 h a 38 ºC para promover la capacitación. Luego se separaron en 3 alícuotas y se incubaron 1h a 38 ºC con: P4 95 µM y controles sin y con vehículo (DMSO). Se determinó el % de espermatozoides reaccionados (AC y PNA) a tiempo 0h y 4h post-Androcoll. Se realizó análisis de correlación entre los resultados (Pearson). Se monitoreó la capacitación evaluando el % de espermatozoides capacitados (patrón B con Clortetraciclina) a tiempo 0h y 3h post-Androcoll. Los espermatozoides seleccionados respondieron a la capacitación, ya que el % de espermatozoides capacitados (patrón B a CTC) fue mayor a las 3h (p<0,05) que a 0h. Luego de la incubación con P4, se detectó un aumento (p<0,05) en el % espermatozoides reaccionados respecto a los controles con la técnica de AC (ausencia de tinción en acrosoma) y con PNA/PI (presencia de tinción en acrosoma) y los resultados correlacionaron (p<0,05; r=0,46).  Sin embargo, la tinción vital (PI) acoplada a PNA reveló un aumento (p<0,05) en el % de espermatozoides muertos a las 4h (58%) de incubación respecto a 0h (48%). El % espermatozoides ?Reaccionados Vivos? detectados con PNA/PI fue mayor en las muestras con P4 (p<0,05) que en los controles pero no correlacionó con los ?Reaccionados? con AC (p>0,05; r=0,28). La técnica AC puede aplicarse de manera indistinta a PNA/PI en suspensiones espermáticas con alta vitalidad pero debería acoplarse a una tinción vital en muestras de baja vitalidad.