Estrategias para la evaluación del a capacitación y la reacción acrosomal de espermatozoides equinos

FERRANTE A; BACA CASTEX C; CARRETERO MI; MARIN BRIGGILER, CLARA I; VAZQUEZ-LEVIN M; MIRAGAYA M

Buenos Aires

Jornada; Cuartas Jornadas de Jóvenes Investigadores en Ciencias Veterinarias 2014; 2014

Facultad de Ciencias Veterinarias

Para la fecundación del ovocito, los espermatozoides deben sufrir una serie de cambios conocidos como capacitación y responder a agentes que inducen la exocitosis del acrosoma o reacción acrosomal (RA). Si bien en la literatura hay técnicas que evalúan la capacitación y RA, las usadas para evaluar el estado del acrosoma no monitorean en forma conjunta la viabilidad espermática. El presente trabajo tuvo como objetivos 1) evaluar la ocurrencia de capacitación de espermatozoides equinos in vitro y 2) evaluar la movilidad, viabilidad y  estado del acrosoma luego de la incubación con 3 inductores de la RA. Se analizaron 12 eyaculados recolectados mediante vagina artificial de 3 padrillos fértiles. La fracción de espermatozoides móviles se obtuvo por  centrifugación en Androcoll-ETM. Para promover la capacitación, los espermatozoides seleccionados se incubaron en medio MW-BSA por 3 hs a 38ºC. Posteriormente las suspensiones espermáticas se separaron en 5 alícuotas incubadas 1 h a 38ºC con: 1) Ionomicina 10 µM, 2) A23187 5 µM, 3) Progesterona 95 µM, 4) y 5) controles con y sin vehículo (DMSO). A tiempo 0 y 3 hs, se evaluó capacitación (tinción con Clortetraciclina) y a tiempo 0 y 4 hs, se evaluó  movilidad (microscopía de contraste de fase), viabilidad junto con estado del acrosoma (tinción con FITC-PNA/PI). A las 3 hs se observó un aumento (p<0,05) en el % de espermatozoides capacitados y reaccionados comparadas con las muestras a tiempo 0. A las 4 hs se observó una disminución (p<0,05)  en la movilidad espermática en todas las alícuotas, siendo nula en las incubadas con A23187. La tinción con FITC-PNA/PI reveló alto (p<0,05) % de espermatozoides muertos reaccionando y reaccionados en las alícuotas incubadas con Ionomicina y A23187 respecto de los controles (p< 0,05). En contraste la Progesterona aumentó (p<0,05)  el % de espermatozoides vivos reaccionando y reaccionados en relación a las muestras no tratadas y tratadas con Ionomicina y A23187. En conclusión, el uso de la tinción con FITC-PNA/PI permitió establecer que ciertos protocolos de inducción de RA reportados en la literatura conducen a la muerte espermática. Ensayos en curso están enfocados en optimizar estos protocolos (concentración y tiempos de incubación con inductores de RA) para obtener suspensiones de espermatozoides equinos reaccionados vivos.