Regulación dual del promotor del gen de la proteína asociada a resistencia multidroga 4 (MRP4/ABCC4) mediada por AMPc.

CAROZZO A; SHAYO C; DAVIO C; FERNANDEZ N

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica. Reunión Científica Anual 2013 Sociedad Argentina de Fisiología. XLV Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Farmacología Experimental.; 2013

SAIC

MRP4 excluye una amplia variedad de compuestos exógenos y endógenos y se encuentra asociado al grado de malignidad y diferenciación en distintos tumores. Dicho transportador resulta crucial en la regulación de los niveles intra y extracelulares de AMPc (AMPci/e) implicados en los procesos de progresión tumoral. Por lo tanto, nos propusimos evaluar si el AMPc regula a su vez la expresión de MRP4. Utilizando como modelo la línea celular tumoral pancreática AR42J, observamos que el tratamiento con dbAMPc y Forskolina aumenta los niveles de ARNm de MRP4. Estos resultados fueron confirmados utilizando una construcción reportera conteniendo al promotor de MRP4 rio arriba del cDNA de luciferasa. Sin embargo, el tratamiento con AMPce condujo a una disminución en la actividad del promotor. Dado que PKA y EPAC representan los blancos tradicionales del AMPci, evaluamos el papel de estas proteínas en la regulación de MRP4, utilizando construcciones dominantes negativas o salvajes. Los resultados indican que EPAC2 media los efectos positivos sobre la actividad del promotor. Consistentemente, la presencia de una construcción Rap-GAP bloqueó en un 50% el efecto positivo de dbAMPc, sugiriendo a la actividad GEF de EPAC2 como la mediadora de la inducción de la expresión de MRP4 por el AMPci. Dado que el tratamiento de las células con AMPce conduce a un incremento en los niveles de pERK evaluamos el papel de esta vía en el efecto negativo de AMPce sobre la actividad del promotor. El tratamiento con PD98059 (inhibidor de MEK) aumentó la actividad del promotor y bloqueó la represión causada por AMPce. A su vez, la activación de la vía por EGF resultó en una menor actividad transcripcional, indicando que la vía de MEK/ERK media el efecto negativo de AMPce sobre la expresión de MRP4. Estos resultados sugieren la existencia de una regulación a nivel transcripcional de MRP4 mediada por el balance entre el AMPci y AMPce, y sugieren un mecanismo de regulación recíproco entre MRP4 y AMPc.