PARTICIPACIÓN DE LAS PEQUEÑAS GTPASAS EN LA POLIMERIZACIÓN DE ACTINA ESPERMÁTICA DURANTE LA CAPACITACIÓN Y LA EXOCITOSIS ACROSOMAL

ROMAROWSKI A.; PRZEPIORA E; BATTISTONE MA; LA SPINA F; CUASNICU P; VISCONTI PE; BUFFONE M

Mar del Plata

Congreso; 58ª Reunión Anual de Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2013

Los espermatozoides (Ezs) de mamífero adquieren capacidad fecundante durante su paso por el tracto femenino en un proceso denominado capacitación, en el cual desarrollan la posibilidad de realizar exocitosis acrosomal (EA). Esta última se adquiere, entre otras cosas, debido a la polimerización de la actina globular (G) en filamentosa (F). El objetivo de este trabajo fue evaluar en Ezs murinos el proceso de polimerización de actina durante la capacitación y estudiar las vías de transducción de señales involucradas, en particular, la participación de las pequeñas GTPasas. Los cambios en los niveles de actina-F fueron evaluados utilizando microscopía de fluorescencia, citometría de flujo e inmunoblot (WB) a distintos tiempos de la capacitación. Observamos un aumento gradual en los niveles de actina-F. Utilizando distintas condiciones experimentales, evidenciamos que este fenómeno no dependería exclusivamente de la activación de la vía de PKA ya descripta en la capacitación. Para estudiar la participación de las pequeñas GTPasas y sus efectores, evidenciamos la expresión de RhoA, RhoC, Rac1, ROCK1, LIMK1/2 y cofilin. Utilizando inhibidores farmacológicos, observamos una disminución en los niveles de actina-F al inhibir Rac1 y no observamos efectos al inhibir RhoA y ROCK. Al evaluar por WB la fosforilación de los efectores LIMK y cofilin, los únicos sustratos conocidos que vinculan la activación de Rac con el proceso de polimerización de actina, observamos un aumento en los niveles de fosforilación de LIMK1/2 pero no de cofilin durante la capacitación. Solamente al inhibir Rac1, se observó una disminución en los niveles de fosforilación de LIMK1/2. Asimismo, al evaluar el porcentaje de EA, observamos una disminución en aquellos Ezs tratados con el inhibidor de Rac1, y no con el de RhoA o ROCK. Estos resultados sugieren que Rac1 se encontraría involucrada en la regulación de la polimerización de actina durante la capacitación vía la activación de la kinasa LIMK1/2.