IBYME   02675
INSTITUTO DE BIOLOGIA Y MEDICINA EXPERIMENTAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
La fertilización induce la exposición transitoria de fosfatidilserina en el ovocito de ratón
Autor/es:
CURIA A; ERNESTO JI; STEIN P; BUSSO D; SCHULTZ RM; CUASNICU, PS; COHEN DJ
Reunión:
Jornada; Oocitos y espermatozoides: nuevas miradas en el estudio de la fecundación; 2013
Institución organizadora:
SAIC
Resumen:
El fosfolípido fosfatidilserina (PS) se localiza normalmente en la cara interna de la bicapa lipídica y en los últimos años se ha demostrado que su translocación a la cara externa de la bicapa es necesaria en distintos procesos celulares diferentes a la apoptosis. En el presente trabajo hemos investigado la ocurrencia de movilización de PS en ovocitos de ratón, los cuales expresan, de acuerdo a ensayos de RT-PCR, la flipasa Atp8a1 y las escramblasas Plscr1 y 3, enzimas responsables de la distribución de PS en la membrana celular. Hemos observado que luego de la fertilización o de la activación partenogenética inducida por tratamiento con SrCl2, los ovocitos presentan un importante aumento en la unión de Anexina 5 fluoresceinada, la cual se une específicamente a PS, respecto de los ovocitos no fertilizados. Este aumento en la marcación fluorescente no se observa cuando los ovocitos son previamente tratados con el quelante intracelular de Ca2+ BAPTA-AM, indicando que es necesario un aumento en la concentración intracelular de Ca2+ para la exposición de PS. La fluorescencia se observa en toda la superficie del ovocito con excepción de las regiones que recubren en huso meiótico y el sitio de entrada del espermatozoide. La exposición de PS también es observada en ovocitos activados provenientes de hembras deficientes para la enzima CaMKIIγ (KO), los cuales no pueden salir del arresto en metafase II a pesar de presentar oscilaciones de Ca2+ normales. Por el contrario, la exposición de PS no se observa en ovocitos activados con el quelante de Zn2+ TPEN, los cuales salen del arresto meiótico en ausencia de liberación de Ca2+. La exposición de PS también se observa cuando los ovocitos son activados con etanol, pero no así cuando son activados con ionóforo de Ca2+, sugiriendo que la fuente y concentración citoplasmática de Ca2+ son relevantes para la movilización de PS. Finalmente, el tratamiento de los ovocitos con cytochalasin D, que desorganiza los microfilamentos de actina, o con jasplakinolide, que estabiliza microfilamentos, previamente a la activación muestra que la externalización de PS en un proceso dependiente de actina. En resumen, el aumento de Ca2+ que ocurre durante la activación del ovocito induce una exposición transitoria de PS en los ovocitos fertilizados que no está asociada a apoptosis.