Vías de señalización asociadas a la regulación por bicarbonato del proceso de capacitación de espermatozoides de rata.

DA ROS V, COHEN DJ, PIGNATARO O, VISCONTI P Y CUASNICU PS

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica.; 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Resultados previos de nuestro grupo mostraron que el bicarbonato (B) es requerido para la capacitación de espermatozoides de rata regulando la fosforilación en tirosina, la migración de la proteína DE al segmento ecuatorial y la capacidad de fusión del espermatozoide. Sin embargo, mientras la fosforilación ocurre incluso cuando el B es reemplazado por un análago del cAMP, los otros 2 parámetros requerirían propiedades adicionales del ión. Para estudiar la vía de transducción involucrada en la regulación de la capacitación mediada por B, se midieron los niveles intracelulares de cAMP por RIA en espermatozoides incubados en presencia o ausencia del anión. Se observó un aumento en el tiempo en los niveles de cAMP con un pico a 30 min, sólo en espermatozoides incubados en presencia de B. Para investigar si la acumulación de cAMP era inducida por ésteres de forbol, los espermatozoides fueron incubados con 10 µM PMA en presencia o ausencia de B. Los resultados indican que los espermatozoides incubados 30 min con B y PMA mostraron un aumento significativo en el contenido de cAMP no observado en ausencia de PMA. Esta acumulación de cAMP inducida por PMA fue dependiente de B. Para evaluar si el cAMP producido era requerido para los tres parámetros de capacitación analizados, se estudió la relevancia de PKA mediante la utilización del inhibidor H89. La fosforilación en tirosina, analizada por Western blot e inmunofluorescencia indirecta, fue significativamente reducida en presencia de 30 µM H89. Sin embargo, la migración de DE no se vio afectada y la capacidad de fusión sólo fue parcialmente inhibida por H89, incluso en presencia del inhibidor durante la co-incubación de gametas. En conjunto, los resultados obtenidos proveen mayor información sobre la regulación de la capacitación de espermatozoides de rata por bicarbonato y confirman que algunos eventos asociados a la capacitación y dependientes del anión serían independientes de la vía de cAMP/PKA.