IBYME   02675
INSTITUTO DE BIOLOGIA Y MEDICINA EXPERIMENTAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
IDENTIFICACIÓN DE HEPARÁN SULFATO EN EL OVOCITO HUMANO Y CARACTERIZACIÓN PARCIAL DE LOS GLICOSAMINOGLICANOS SINTETIZADOS POR EL COMPLEJO CÚMULUS OVOCITO
Autor/es:
ROMANATO M ; FARRANDO B ; JULIANELLI V ; CALVO L; CALVO JC
Lugar:
Cancún
Reunión:
Congreso; Magno Congreso Internacional de Endocrinología, Diabetes y Reproducción; 2013
Institución organizadora:
ALAD-SMNE-ALIRH
Resumen:
Justificación: La capacidad del ovocito para descondensar la cromatina espermática varía de acuerdo al grado de maduración del ovocito, presentando su máximo cuando el ovocito se encuentra en estadio de metafase II (MII). Existen glicosaminoglicanos (GAGs), como por ejemplo el heparán sulfato (HS), en el complejo cúmulus ovocito (COC) en diferentes especies, incluyendo la humana. En nuestro laboratorio, demostramos que los espermatozoides humanos se pueden descondensar in vitro utilizando ovocitos frescos de ratón y que el HS presente en el ooplasma murino sería el responsable. Esto nos llevó a proponer que el HS podría estar actuando como agente descondensante del espermatozoide humano in vivo. Objetivos: 1)Identificar la presencia de HS en ovocitos humanos en diferentes estadios de maduración. 2)Caracterizar los GAGs sintetizados por el ovocito, las células del cúmulus (CC) o el COC intacto. Materiales y Métodos: 1) Inmunicitoquímica de ovocitos humanos: ovocitos en estadio de vesícula germinal (VG), MII y CC (Fertilab/CEGyR) se fijaron, permeabilizaron y bloquearon. Se determinó presencia HS utilizando anticuerpo primario monoclonal (IgM) y segundo anticuerpo policlonal anti IgM de ratón conjugado a FITC. Se observó al microscopio confocal y se cuantificó (unidades arbitrarias) la intensidad de fluorescencia (Image J). 2) Marcación metabólica y aislamiento de proteoglicanos: ovocitos, COCs o CC se cultivaron durante 24 hs en presencia de [35S]-sulfato y [3H]-glucosamina. Se hicieron extractos con clorhidrato de guanidina, acetato de Na y Tritón X-100, y se cromatografiaron en columnas de tamiz molecular (Sephadex G-50 y Sephacryl S-500 HR). Se determinó radiactividad en los eluídos en contador beta. Resultados: 1) HS está presente en el citoplasma de ovocitos MII (65510 ± 1582 UA vs. 8579 ± 742 UA control negativo, Unpaired t-test (p