N-acetilglucosamina y vía glicolítica en la reacción acrosomal

SANTIAGO AINCIBURU; KARINA ZITTA; PATRICIA V. MIRANDA

Mar del Plata

Congreso; LIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2006

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

La reacción acrosomal (RA) es un evento exocitótico que ocurre en el espermatozoide y es indispensable para la fertilización. Resultados previos de nuestro laboratorio demostraron que la N-acetilglucosamina (GlcNAc) inhibe la RA en espermatozoides de hamster. Dado que la GlcNAc es un inhibidor de la hexoquinasa, primer enzima del camino glicolítico, analizamos la participación de esta vía en la RA y su relación con el efecto de la GlcNAc. Espermatozoides de hamster fueron purificados e incubados en medio TALP suplementado con 3 mg/ml de BSA para su capacitación. La RA fue medida por microscopía óptica 30 minutos después del tratamiento o a tiempo final (6 hs de incubación). El tratamiento de los espermatozoides capacitados con bloqueantes de la vía glicolítica (2-deoxiglucosa, 2DG, o 3-metilglucósido, 3MG, 5 mM) disminuyó el porcentaje de espermatozoides reaccionados (37±10 y 27±6% para 2DG y 3MG respectivamente, p<0,05 vs control = 73±7%). Para determinar si la GlcNAc afectaba la vía glicolítica, se trazaron curvas de inhibición para 2DG y GlcNAc y se analizó el efecto de dosis sub-óptimas de ambos compuestos juntos y separados. La RA fue significativamente menor en presencia de los dos agentes (43±3% para GlcNAc+2DG, p<0.05 vs 58±3 y 62±9 % para GlcNAc y 2DG respectivamente, control =83±4%). Por otro lado, la RA inducida con ionóforo de Ca (A23187, 1 uM) fue inhibida por GlcNAc (43±15 vs. 87±4% con y sin GlcNAc, respectivamente, p<0.05). Lo mismo ocurrió al inducir con un agonista de IP3 (Timerosal, 3 uM) en presencia de GlcNAc o 2DG (44±4 y 50±3% respectivamente, p<0.05 vs. 67±4%). Estos resultados indican que la inhibición de la RA por GlcNAc no está relacionada con la vía glicolítica, aunque el funcionamiento de la misma es fundamental para la ocurrencia de la RA. Tanto el efecto de la GlcNAc como la participación de la glicólisis en la RA serían posteriores a la entrada masiva de Ca al espermatozoide.