Asociación de GLIPR1L1/GLIPR1L2 con espermatozoides y su participación en el proceso de fertilización.

ERNESTO JI; CURIA A; WEIGEL MUÑOZ M; COHEN DJ; CUASNICÚ PS

Buenos Aires

Jornada; XIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biología (SAB); 2012

Sociedad Argentina de Biología (SAB)

En base a evidencias sugiriendo la presencia de GLIPR1L1 y GLIPR1L2 en espermatozoides, investigamos su asociación a la gameta, comportamiento durante la capacitación y rol en la fertilización. Estudios de Western blot (Wb) e inmunofluorescencia  (IIF) utilizando anticuerpos contra GLIPR1L1 y GLIPR1L2 recombinantes generadas en nuestro laboratorio confirmaron la presencia de ambas proteínas en espermatozoides y revelaron su localización en la región dorsal de la cabeza de espermatozoides vivos, y en cabeza y cola de células permeabilizadas. El tratamiento de los espermatozoides con diferentes agentes mostró que  NaCl (máx 2M) o DTT (250 uM) no fueron capaces de removerlas de las células mientras que el Tritón X 100 (1%) extrajo completamente ambas proteínas. La exposición a PNGasa F  y fosfolipasa C reveló que ambas proteínas estarían glicosiladas y que GLIPR1L1 se uniría por GPI. Ensayos de Wb e IIF indicaron que GLIPR1L1 y GLIPR1L2 permanecen en los espermatozoides luego de la capacitación y reacción acrosomal (RA) sin sufrir cambios post-traduccionales. Finalmente, estudios de fertilización in vitro utilizando ovocitos con y sin zona pelucida (ZP), mostraron que mientras los anticuerpos no fueron capaces de afectar la fusión de gametas, lograron inhibir significativamente la unión de los espermatozoides a la ZP sin afectar su viabilidad, motilidad y RA. En conjunto, estos resultados apoyan a GLIPR1L1 y GLIPR1L2 como dos nuevos mediadores del proceso de fertilización.