Caracterización de dos mutantes en F243 del receptor H2 a histamina. Efecto sobre el mecanismo de acción de agonistas inversos

GRANJA GALEANO, GINA; ECHEVERRIA, EMILIANA; FABIAN, LUCAS; FAZZARI, EZEQUIEL; SHAYO CARINA; DAVIO CARLOS; FERNANDEZ NATALIA; MONCZOR FEDERICO

Mar del Plata

Congreso; LVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2012

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

Previamente describimos que el receptor H2 a histamina (rH2), perteneciente a la familia de receptores acoplados a proteína G (GPCR), puede adquirir una conformación inactiva que secuestra proteína Gs interfiendo en la señalización de GPCRs que utilizan la misma vía. A su vez, mutaciones de la F424 del rH1 inducen espontáneamente una conformación del receptor capaz de secuestrar Gq. Mediante estudios de alineación determinamos que el residuo homólogo en el rH2 es la F243. Por ello decidimos estudiar el efecto de mutar F243 sobre la funcionalidad del rH2.Mediante modelado por homología observamos que las interacciones que presenta este residuo son del tipo C-C, por lo tanto lo mutamos por A, provocando la pérdida de las mismas o por S, ganando una interacción del tipo puente de H.Mediante ensayos de unión, en células HEK293T transfectadas, verificamos la correcta expresión en membrana de las mutantes. Al medir los niveles de AMPc, observamos que si bien las mutantes presentaron una menor actividad constitutiva, su capacidad de respuesta a agonistas o agonistas inversos no se vio disminuida.Para evaluar la capacidad de las mutantes de interferir sobre la señalización de otro GPCR, las tres variantes fueron cotransfectadas con el receptor beta2adrenérgico. Sólo la coexpresión con la mutante F243S provocó una reducción en la respuesta a isoproterenol (30% vs rH2wt) indicando que dicha mutación induce espontáneamente una conformación capaz de secuestrar Gs. A su vez, cimetidina, ligando específico de rH2, incapaz de promover el secuestro de Gs al interactuar con el rH2wt, disminuyó un 45% la respuesta del beta2A al actuar sobre las mutantes. Mediante el modelo del complejo cúbico ternario pudimos explicar el efecto de las mutaciones como una disminución en la capacidad de activación del receptor cuando se encuentra unido a la proteína G. Estos resultados indican la importancia de la F243 sobre el mecanismo de acción de agonistas inversos del rH2 y el secuestro de la proteína G.