AMPc EXTRACELULAR COMO FACTOR AUTOCRINO DE CRECIMIENTO EN CÉLULAS LEUCÉMICAS HUMANAS

DIEZ F; COPSEL S; GOMEZ N; DODURISBOURE R; FERNANDEZ N; SHAYO, C; DAVIO C

Mar del Plata

Congreso; LVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica.; 2012

SAIC

Recientemente hemos descripto en diferentes modelos de leucemia mieloide aguda que los niveles de AMPc intracelular (AMPci) son regulados por proteínas de resistencia a multidrogas (MRPs), en particular MRP4, quien media la exclusión de dicho nucleótido cíclico. Dado que el bloqueo farmacológico de este transportador con probenecid causó una inhibición de la proliferación sin modificar los niveles de AMPci nos propusimos evaluar el rol del AMPc extracelular (AMPce). El tratamiento de las células leucémicas humanas U937 con AMPc logró revertir la inhibición de la proliferación inducida por probenecid de forma tiempo y concentración dependiente (CE50 1nM). En este sentido el AMPce condujo a la activación de ERK 1/2 (Western Blot) clásicamente asociada a procesos proliferativos. Sobre la base de dichos resultados y a fin de detectar sitios de unión específicos a AMPc en células intactas realizamos ensayos de unión a radioligando [3H]-AMPc, demostrando la expresión de sitios específicos, saturables y desplazables por AMPc (Kd 10nM, Bmax 35000 sitios/célula). A su vez, células U937 con menores niveles de MRP4 (U937-MRP4shRNA) presentan mayor número de sitios en membranas (Kd 10nM Bmax 60000 sitios/célula) sugiriendo que dicha expresión estaría regulada por AMPc. Con el fin de confirmar que los efectos observados son mediados por AMPc y no por un producto metabólico del mismo, determinamos que dicho nucleótido cíclico permanece estable en el medio de cultivo por lo menos 8 h. A su vez, se realizaron ensayos de unión en presencia de 100microM α,β-metilen-adenosina-5′-difosfato (inhibidor de ectofosfodiesteras), sin observarse modificaciones en los parámetros de Kd-Ki y número de sitios. Estos resultados nos permiten postular al AMPc como un factor autocrino de crecimiento, incrementando la complejidad de las señales que involucran a este mensajero.