ROR1 contribuye al desarrollo y progression de melanoma.

FERNANDEZ N; DANIELA LORENZO; PICCO ME; LOPEZ BERGAMI, P

Buenos Aires

Jornada; XXVIII Jornadas de Oncologia; 2012

Instituto Roffo

ROR1 participa en el desarrollo y progresión de melanoma.Fernández N.B., Lorenzo D.M., Bravo M.S., López-Bergami P.Instituto de Biología y Medicina Experimental – CONICET. Buenos Aires, ArgentinaLos receptores ROR1 y ROR2 pertenecen a una familia conservada de receptores tirosinaquinasa que juegan un papel importante en el desarrollo de varios órganos y tejidos,así como también en enfermedades humanas. Fueron originalmente clonados comoreceptores huérfanos pero actualmente son reconocidos como receptores de la vía deseñalización de Wnt. Muchas de las funciones de ROR1 y ROR2 durante el desarrolloresultan redundantes, sin embargo nuevas evidencias sugieren que juegan roles diferentesen células de mamífero adultas. Se ha demostrado que ROR2 participa en la señalizaciónno canónica de Wnt y al mediar la señalización por Wnt5a, ROR2 está implicado en lamigración y polaridad celular. En contraste con ROR2, ROR1 fue estudiado con menorprofundidad. Se observó su sobreexpresión en leucemia linfocítica crónica confiriendo unamayor supervivencia a estas células. Coincidentemente, ROR1 fue identificada como unaquinasa de supervivencia en células HeLa.En este trabajo determinamos que ROR1 se encuentra activo y sobreexpresado enmelanoma, de manera consistente con la sobreexpresión de WNT5a y la fosforilación deDvl en estas células. Estos resultados nos llevaron a determinar el rol de ROR1 en laproliferación, apoptosis, y demás procesos celulares relacionados con el crecimientotumoral. Para ello generamos líneas celulares que expresaban en forma estable un shorthairpin ARN (shARN) contra ROR1. La expresión de este shRNA provocó una disminuciónen los niveles de ARNm y proteína de ROR1. El silenciamiento de ROR1 disminuyó elcrecimiento celular (determinada por el método de MTT) un 28% y 26% comparado con lascélulas control (shARN scramble) en las líneas A375 y Lu1205, respectivamente. Tambiéndeterminamos cambios en la apoptosis medida por Anexina V e Ioduro de Propidio en uncitómetro de flujo. El silenciamiento de ROR1 aumentó la apoptosis celular inducida porprivación de suero en las células A375 y Lu1205. El silenciamiento de ROR1 tambiénredujo el crecimiento independiente de anclaje en agar blando. Luego de 20 días, lascélulas A375 que expresaban el shARN de ROR1 dieron origen a 95.3 +/- 21.4 coloniasmientras que en las placas control se obtuvieron 203 +/- 42.5 colonias. A su vez, seobservó una disminución en el tamaño de las colonias generadas por células A375transducidas con el shARN de ROR1. Estos resultados indican que ROR1 contribuye alcrecimiento celular en melanoma. Para determinar el rol de ROR1 en la adhesión celular decélulas A375 se realizaron ensayos de adhesión cuantificados por tinción con cristalvioleta. Las células fueron disociadas con una solución de EDTA y sembradas en placas de96 pocillos. Luego de 30 minutos a 37°C, las células shARN ROR1 se adhirieron conmayor eficiencia de que las células control (DO: 0,466 +/- 0,044 vs. 0,324 +/- 0,057,p<0.01). Estos resultados indican que ROR1 está implicado en la adhesión celular comofue previamente determinado para WNT5a y Dvl. Estos resultados sugieren que la vía deseñalización Wnt-ROR1 juega un importante rol en la progresión de melanoma, afectandoel crecimiento celular, la apoptosis y la adhesión celular.