Activación de vías de señalizacion por Ror1 en melanoma.

LORENZO D; FERNANDEZ N; PICCO ME; LOPEZ BERGAMI, P

Mar del Plata

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2012

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Activación de la cascada de señalización de ROR1 en melanomaDaniela Lorenzo, Natalia Fernández, María Elisa Picco, Pablo López BergamiInstituto de Biología y Medicina Experimental-CONICETEl melanoma representa un importante problema de salud debido a su mal pronóstico y la faltade terapias efectivas en el estadio metastásico. Entre otras causas, esto se debe a que enmelanoma se observan multiples vías de señalización implicadas en tumorigénesis activadasconstitutivamente. Se ha demostrado que las vías de Wnt canónico y no canónico tambiénse encuentran activadas. Con el fin de caracterizar la vía de señalización Wnt no canónicoen melanoma se determinaron los niveles de ARNm de la familia de receptores Fzd y RORmediante PCR en tiempo real. Observamos un incremento en los niveles de ROR1 y Fzd7 enlíneas celulares de melanoma con respecto a los melanocitos normales. Este resultado fueconfirmado por Western blot (WB). Río abajo en la vía de Wnt no canónica observamos queDvl-2 se encuentra fosforilada en varias líneas de melanoma. Para demostrar la contribuciónde ROR1 en la fosforilación de Dvl-2 se introdujo en células de melanoma Lu1205 y A375 unshort hairpin ARN contra ROR1. El silenciamiento de ROR1 disminuyo los niveles basalesde fosforilación de Dvl-2. Por otro lado, determinamos la activación de pequeñas GTPasasmediante ensayos de “pull-down”. Observamos que el silenciamiento de ROR1 produce unadisminución en los niveles de actividad de RhoA/C. Además, estudiamos por WB las isoformasde la proteína kinasa C (PKC). Encontramos que el silenciamiento de ROR1 genera aumentosen los niveles de PKC alfa y disminución en los niveles de PKC beta. Asimismo, mediante larealización de ensayos reporteros determinamos que ROR1 no esta vinculado a la vía canónicade Wnt ya que su silenciamiento no afecta la activación del reportero TOP en respuestaa Wnt3a. Nuestros resultados muestran que ROR1 esta sobreexpresado en melanoma ycontribuye a la activación de la vía de señalización Wnt no canónica a través de la activaciónde Dvl-2, RhoA/C y PKC. Estas evidencias sugieren que ROR1 podría estar implicado en eldesarrollo y la progresión del melanoma.