Factor de Crecimiento Fibroblástico (FGF2) en hipófisis de ratones knockout para el receptor dopaminérgico D2 (D2R-/-, ko).

CRISTINA C, PÉREZ MILLÁN MI, SYCZ G, ORNSTEIN AM, DÍAZ-TORGA G Y BECÚ-VILLALOBOS D

Mar del PLAta, Buenos Aires

Congreso; Sociedad Argentina de Investigación Clínica.; 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica.

Los ratones D2R-/- desarrollan hiperplasia hipofisaria de lactotropos y son un modelo de prolactinomas. Estos tumores frecuentes en hipófisis responden a la terapia con agonistas dopaminérgicos salvo un bajo porcentaje que es resistente. Nosotros demostramos que las células folículoestrelladas hipofisarias ko producen mayores niveles de VEGF que las wt, promoviendo la angiogénesis y el crecimiento celular (Endocrinology 146,2005). En este trabajo estudiamos los efectos de FGF2 en nuestro modelo experimental. FGF2 es un potente angiogénico con efectos proliferativos sobre muchos tipos celulares. FGF2 indujo la liberación de PRL en células adenohipofisarias de ambos genotipos. A la dosis de 10 ng/ml, estimuló la proliferación de las células ko y wt evaluada por captación de 3 H-Timidina (% de aumento 38,5 + 4,5 y 28,1 + 6,1 para ko y wt, respectivamente) y por la técnica de MTS donde obtuvimos resultados similares. Al estudiar los mecanismos moleculares relacionados a la acción proliferativa de FGF, vimos que éste indujo una activación de MAPKs superior en ko, lo que correlacionó con los mayores niveles de FGFR1 en este genotipo (IHQ y Western Blot 207,6 + 30,5 y 88,9 + 20,9 % para ko y wt respectivamente, Western p< 0.05) Sin embargo, por ELISA e Inmunofluorescencia los niveles de FGF2 fueron menores en  ko que en wt (0,79 y 2,16 ngr/ugr proteína, p<0.001 en homogenatos, y 0,67 ko vs 3,03 wt pgr/ ug proteína, p<0.001 en lisados celulares). No obstante los niveles séricos de FGF2 no mostraron diferencias entre grupos. El medio condicionado de células hipofisarias de ambos genotipos estimuló la proliferación de células endoteliales HUVEC, efecto que fue revertido por un anticuerpo contra FGF2. La baja expresión de FGF2 en ko puede asociarse a la benignidad, al lento crecimiento de los prolactinomas, y a la baja frecuencia de metástasis. El estudio de factores de crecimiento en estos tumores es importante para su seguimiento y diseño de nuevas terapéuticas. Nuestros resultados: 1)FGF2 a la dosis de 10 ng/ml induce liberación de PRL en células adenohipofisarias de ambos genotipos. 2)A esa misma dosis estimula la proliferación de las células en cultivo (MTS y Captación de Timidina) 3)Mayor expresión de receptores de FGF (FGFR1) en ko que en wt por IHQ y por WB como resultado de la menor expresión del factor de crecimiento y asociado a una mayor activación de MAPKs por dicho factor en kos 4)Menor nivel de expresión de FGF2 en homogenatos de hipófisis y lisados celulares de ko respecto a wt determinado por ELISA. No hallamos diferencias en los niveles séricos de FGF entre genotipos. 5)Medios condicionados de cultivos de ambos grupos estimulan la proliferación de células HUVEC y el bloqueo de la acción de FGF2 con un anticuerpo específico reduce en forma parcial la proliferaión de estas células