La mortalidad de los ovocitos de ratones deficientes para el receptor de HDL SR-BI no se asocia a apoptosis ni aumento de especies reactivas de oxígeno.

SANTANDER N, QUILAQUEO L, ROSSI S, RIGOTTI A, PARBORELL F Y BUSSO D.

Viña del Mar

Congreso; XXIII Reunión Anual de la Sociedad Chilena de Reproducción y Desarrollo,; 2012

Sociedad Chilena de Reproducción y Desarrollo

La deficiencia de SR-BI produce infertilidad femenina en ratón, asociada a muerte prematura de ovocitos ovulados. En este estudio evaluamos la relación entre la deficiencia de SR-BI y dos procesos que podrían explicar dicha muerte: apoptosis y estrés oxidativo. Dado que en estudios previos no detectamos apoptosis en ovocitos ovulados de ratonas SR-BI -/-, estudiamos apoptosis ovárica. Los niveles de caspasa-3 activa (Inmunohistoquímica) y fragmentación apoptótica del ADN (TUNEL) fueron similares en ovarios de ratonas silvestres y SR-BI-/-. Estudiamos los niveles de proteínas pro- y anti-apoptóticas mediante Western blot en extractos proteicos ováricos, sin encontrar diferencias significativas en las relaciones Bcl-2:Bax o Bcl-xL:Bcl-xS. Para analizar la posible inducción específica de apoptosis en ovocitos y/o células de granulosa (CG) de folículos antrales, estos tejidos fueron obtenidos de cortes de ovarios silvestres y SR-BI-/- mediante microdisección láser, determinándose los niveles de mRNA para p53 usando RT-PCR cuantitativo. No se detectaron diferencias significativas en la expresión de p53 en ovocitos o CG de ambos genotipos. Por otro lado, considerando que la ovulación es un proceso generador de especies reactivas de oxígeno (ROS), analizamos si ovocitos ovulados de ratonas SR-BI -/- presentaban niveles anormales de ROS. Los ovocitos fueron incubados con diclorofluoresceína-diacetato, agente fluorescente indicador de ROS, en paralelo con ovocitos silvestres. Los niveles de fluorescencia fueron similares en ambos tipos de ovocitos e inferiores a los detectados en un control positivo (ovocitos + H2O2). En conjunto, los resultados sugieren que la letalidad prematura de los ovocitos de ratones SR-BI -/- no se asocia a un aumento de la apoptosis ovárica ni tampoco a un incremento en los niveles de ROS.