EVIDENCIA DE UNA CONDENSACIÓN DIFERENCIAL EN LA CROMATINA DE ESPERMATOZOIDES MURINOS, USANDO DERMATÁN SULFATO COMO AGENTE DESCONDENSANTE.

SÁNCHEZ M; FONTANA, V; ROMANATO M; JULIANELLI V; CALVO L; CALVO JC

Ciudad de Panamá

Congreso; XXII Reunión Bienal de la Asociación Latinoamericana de Investigadores en Reproducción Humana (ALIRH).; 2011

ALIRH

EVIDENCIA DE UNA CONDENSACIÓN DIFERENCIAL EN LA CROMATINA DE ESPERMATOZOIDES MURINOS, USANDO DERMATÁN SULFATO COMO AGENTE DESCONDENSANTE. Justificación La descondensación de la cromatina espermática es fundamental para formar el pronúcleo masculino y permitir singamia. Requiere la tiorreducción de disulfuros de las protaminas por GSH y la acción de una molécula con carga negativa para el intercambio con las histonas ovocitarias. Describimos para espermatozoides humanos que esta molécula es heparán sulfato. A diferencia del humano, con espermatozoides murinos encontramos que el dermatán sulfato (DS) también descondensa la cromatina. Las diferencias observadas entre ambas especies indicarían una condensación diferencial de la cromatina. Objetivos Estudiar el proceso de descondensación en espermatozoides murinos, utilizando como agente descondensante al DS, en comparación con heparina y evaluar posibles diferencias en el grado de condensación de la cromatina. Metodología Los animales se sacrificarán de acuerdo a las normas establecidas para el tratamiento ético de animales. En forma aséptica se obtendrán los espermatozoides epididimarios, que serán descondensados incubando 3-5 x106 espermatozoides en medio con Heparina/DS y GSH en un volumen final de 0.3 ml durante distintos tiempos a 37 °C en una atmósfera de 5% de CO2. Se fijarán con glutaraldehído 2% en PBS y se determinará el porcentaje de espermatozoides descondensados en microscopio con contraste de fases, clasificando según la refringencia, el aspecto granuloso y tamaño del núcleo: sin cambios (S), moderadamente descondensados (M), o groseramente descondensados (G). El porcentaje de espermatozoides descondensados es la suma (M+G). Los experimentos se realizarán por duplicado y se evaluarán al menos 200 células en cada muestra. Resultados y conclusiones El DS induce un grado de descondensación similar al de heparina, con cinética de descondensación para ambos glicosaminoglicanos también semejante (t0.5 = 43.55 + 2.19 min para Heparina y 35.45 + 2.17 min para DS). Sin embargo, combinando ambos, se observa un efecto sinérgico con disminución del t0.5 a 17.96 + 1.2 min, lo que se corresponde con un incremento en la descondensación de 3 veces por encima de la suma de los efectos individuales, indicando una posible diferencia en el grado de compactación de la cromatina, con un acceso diferencial de cada glicosaminoglicano. Esta compactación diferencial podría tener incidencia en la clínica de fertilización asistida, al observar fallas en la descondensación.