Rol fisíológico de Gal-l en la sobrevida de enterocitos en situaciones de inflamación

PAPA GOBBI R; MUGLIA C; TOSCANO MA; RABINOVICH GA; DOCENA GH

San Miguel de Tucuman

Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología.; 2011

Sociedad Argentina de Inmunología

Las células epiteliales intestinales son un componente fundamental del compartimento epitelial y tienen una activa participación en la regulación de la permeabilidad intestinal y en la modulación del sistema inmune asociado a mucosas. Previamente hemos descripto que galectina-l (Gal-I) induce la apoptosis de enterocitos humanos y murinos, mecanismo que puede resultar relevante para la sobrevida de estas células durante su maduración a lo largo del eje cripta/vellosidad. El objetivo de este trabajo fue estudiar la apoptosis de enterocitos murinos en diferentes Condiciones de inflamación y ahondar en los mecanismos implicados en el proceso de muerte celular. Se aislaron enterocitos de intestino delgado de ratón de las cepas SVJl29 y BALB/c, y se estudió la capacidad de unión a Gal-1 biotinilada e inducci6n de apoptosis, en cultivo con TNF-a, INF-r, ILS o fLI3 por espectrofluorometría, inmunoblotting y por citometría de flujo en ensayos de asa ligada intestinal. Hallamos que enterocitos incubados en presencia de diferentes citoquinas pro-inflamatorias incrementaron su capacidad de unión a Gal-l (121: 3% cél. positivas en presencia de TNF-a; 55 +/- 14%, con INF-g; 16 +/- 6%, con IL-5; 76 +/- 8%, con IL-13 vs 0,9 +/- 0,2% cél. control, p<0,05). Observamos por fluorescencia que en presencia de Gal-1 se produce un incremento en la actividad de Caspasa-3 (38+/-2 vs 22+/- 1 ua/mg de proteína) y un aumento en la actividad caspasa-9 (45+/-5 vs 22+/- ua/mg de proteína), no así en caspasa-8 (1.25+/- 0,75 vs 3+/- 1ua/mg), lo cual infiere la participación de la vía mitocondrial en el mecanismos de muerte celular. Estudios por citometría de flujo y westem blot en asa ligada mostraron un significativo aumento en la expresión de las proteínas pro-apopt6ticas Bax y Bad (P < 0,05 en ambos casos), junto una disminuci6n de la proteína anti-apopt6tica BcI-2 (P < 0,05). En conclusión, estos resultados sugieren que en condiciones inflamatorias Th1 y Th2 se produce un incremento en la expresión de receptores para Gal-1, lo cual induce una mayor sensibilidad de los enterocitos a la apoptosis, por la vía intrínseca  dependiente de caspasas. Estos resultados permitirían explicar la mayor tasa de muerte de estas células descripta en enfermedades alérgicas y enfermedades inflamatorias gastrointestinales, en la cuales la integridad de la barrera epitelial se encuentra alterada.