Caracterización del proceso de exclusión de AMPc mediado por MRPs en modelos de carcinomas ductales pancreáticos humanos

CAROZZO A; DIEZ F; COPSEL S; BIANCIOTTI L; SHAYO C; FERNANDEZ N; DAVIO C

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC), Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología 2011 y el II Congreso Nacional de la Asociación Argentina de Ciencia y Tecnología de Animales de Laborat; 2011

SAIC

Diversos reportes indican que el AMPc está implicado en procesos de proliferación y diferenciación de células normales y malignas. Dado que el cáncer de páncreas representa uno de los tipos de cáncer con mayor tasa de mortalidad y a fin de establecer un posible blanco terapéutico nos planteamos estudiar el mecanismo de exclusión del AMPc en células ductales de carcinoma pancreático (HPAF, PANC1, BxPC3) y el papel de las proteínas de resistencia a multidrogas (MRPs) en este proceso. El nivel de AMPc intracelular resulta del balance entre su producción, degradación y exclusión. Cinéticas de producción de AMPc a Forskolina 33 M, mostraron un incremento significativo en los niveles de AMPc extracelular. En ensayos concentración-respuesta a dicho agente se observó un incremento concentración-dependiente en los niveles intra y extracelulares de AMPc y una exclusión significativamente mayor en el sistema más indiferenciado (PANC1). El tratamiento con probenecid 1 mM (inhibidor de MRPs) llevó a una disminución en el proceso de exclusión del 80%, sugiriendo la implicancia de MRPs en dicho proceso. El MRP4 es el miembro de la familia de MRPs que presenta mayor afinidad por el AMPc. Así, evaluamos mediante Western blot la expresión de MRP4, observando una mayor expresión en las células más indiferenciadas y malignas. Asimismo, el tratamiento con agentes que incrementan los niveles de AMPc, inducen una disminución en los niveles de MRP4. Análisis in silico del promotor del gen de MRP4 muestran varias secuencias que podrían ser reguladas directa o indirectamente por AMPc (sitios CRE y SRE) sugiriendo un posible mecanismo de regulación que dependería de la maquinaria celular. Estos resultados muestran la existencia de mecanismos de exclusión de AMPc en células ductales de carcinoma pancreático y sugieren una correlación entre el grado de malignidad y la regulación de los niveles de AMPc y MRP4.