Efecto de la enzima galactosa 3 O sulfotransferasa 2 recombinante sobre la acumulaci¨®n de l¨ªpidos en un modelo de adipocitos in vitro

COSENTINO, S.; CALZADILLA, P; CALVO, JC; GUERRA LN

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunion Cientíifica de Investigacion Clinica; 2011

Sociedad Argentina de Investigaci¨®n Cl¨ªnica

En nuestro laboratorio estamos interesados en estudiar prote¨ªnas que medien la interacci¨®n entre epitelio y tejido adiposo en la gl¨¢ndula mamaria. Estudiamos la diferenciaci¨®n de los pre-adipocitos a adipocitos, evaluando acumulaci¨®n de triglic¨¦ridos (Tg) y expresi¨®n del factor de transcripci¨®n adipog¨¦nico C/EBP¦Â.  Previamente mostramos que una prote¨ªna purificada TgIF (Tg inhibit factor), secretada por c¨¦lulas mamarias murinas (NMMG), inhibe un 70% tanto la acumulaci¨®n de l¨ªpidos como la expresi¨®n de C/EBP¦Â en adipocitos de rat¨®n (cultivos primarios y l¨ªnea 3T3-L1). Con MALDI demostramos que TgIF ser¨ªa la enzima galactosa 3-O-sulfotransferasa 2 (GST). Ahora, nuestro objetivo es evaluar el efecto de GST recombinante sobre los par¨¢metros descriptos. cDNA de GST clonado en pSVK 3 se amplific¨® utilizando como marcador de selecci¨®n ampicilina, y se confirm¨® su presencia con enzimas de restricci¨®n. Se obtuvo GST por transfecci¨®n de c¨¦lulas BHK21 (que no producen esta prote¨ªna). Los preadipocitos 3T3-L1 se diferenciaron a adipocitos con agentes inductores, en presencia o ausencia de GST recombinante. Realizamos un estudio temporal (1, 2 y 4 d¨ªas) de la expresi¨®n de C/EBP¦Â durante la diferenciaci¨®n en: c¨¦lulas control no diferenciada (CC), c¨¦lulas diferenciadas (CD) y c¨¦lulas diferenciadas tratadas con GST (DC + GST). La expresi¨®n de C/EBP¦Â se relativiz¨® por actina y por CC. Su expresi¨®n mostr¨® un m¨¢ximo al d¨ªa 4, observando en CD una expresi¨®n 3 veces mayor que en CC, mientras que GST provocar¨ªa una inhibici¨®n, al d¨ªa 4, mayor al 50% (CD: 2.73 UA; CD + GST: 1.32 UA). GST tambi¨¦n inhibi¨® la acumulaci¨®n de Tg en CD, diminuyendo un 31% la media obtenida (CD: 420 + 36 ug Tg/ ug ADN; CD + GST: 288 + 101 ug Tg/ ug ADN). Estos primeros resultados muestran que GST inhibir¨ªa acumulaci¨®n de Tg y expresi¨®n de C/EBP¦Â. Otros autores mostraron relaci¨®n entre sulfataciones y la diferenciaci¨®n de preadipocitos; postulamos que la enzima GST podr¨ªa tener un papel todav¨ªa no descripto.