IBYME   02675
INSTITUTO DE BIOLOGIA Y MEDICINA EXPERIMENTAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Nuevas evidencias acerca del proceso de descondensación del espermatozoide humano in vivo.
Autor/es:
JULIANELLI VL; FARRANDO B; CALVO JC; CALVO L; ROMANATO M
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica.; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
La descondensación (desc) del núcleo espermático humano in vivo, ocurriría en presencia de glutatión (GSH) y heparán sulfato (HS). Demostramos presencia de HS en ovocitos maduros e inmaduros murinos. La desc cromatínica involucra tiorreducción de protaminas y su reemplazo por histonas ovocitarias. Se ha propuesto que estos procesos son sucesivos e independientes. Nuestros resultados previos por método indirecto sugieren que heparina (Hep), análogo del HS, coopera con GSH en la tiorreducción durante la desc espermática humana in vitro. 1) Evaluar presencia de HS en ovocitos inmaduros humanos y células del cúmulus (cc) por inmunocitoquimica en pacientes (clínica de fertilidad con CI firmado), utilizando anti-HS monoclonal y anti-IgM-FITC de ratón. 2) Analizar efecto de Hep sobre tiorreducción cromatínica durante desc espermática humana in vitro por método directo. Núcleos espermáticos (donantes OMS) con tiorreductor: 10mM GSH ó 0,1mM DTT 30?, con o sin Hep (46uM) durante 5?. Se evaluó estado tiorreducido por tinción con reactivo tiólico cuantificando fluorescencia por Image J. Resultados 1) Localización citoplasmática y nuclear de HS en ambos tipos celulares. 2) La exposición a los tiorreductores aumentó intensidad de marca en núcleos sin cambiar tamaño. El agregado de Hep favoreció desc. Promoviendo aparición de núcleos mas grandes y menos marcados debido a perdida de protaminas. La intensidad de fluorescencia de núcleos no descondensados expuestos a GSH+Hep, aumentó respecto al GSH solo (113±7 vs 68±7 unidades arbitrarias; n=4; ANOVA-Dunn). Esto no se observó con DTT. Demostramos que en la desc cromatínica del espermatozoide humano in vitro, la Hep actúa como aceptor de protaminas y favorece la tiorreducción de las mismas por el GSH. También, demostramos presencia de HS en estadios tempranos del desarrollo folicular humano. Esto correlacionaría con el rol fundamental de esta molécula en el ovocito para asegurar una correcta desc y así una fecundación exitosa.