"Inhibición del crecimiento tumoral in vivo de una línea de carcinoma mamario transfectada con shRNA para el receptor de progesterona (RP)"

LAMB, CAROLINE; SALVATIERRA, EDGARDO; LANARI, CLAUDIA; PODHAJCER, OSVALDO

Mar del Plata, Argentina

Congreso; Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2006

Desarrollamos una línea de carcinoma mamaria murina (MC4L5) que expresa RP. Su crecimiento es hormono-independiente (HI) ya que no necesita la administración de la hormona para crecer in vivo e in vitro. Utilizamos esta línea celular sin transfectar (MC4L5-Wt) y transfectada en forma estable con un vector vacío (MC4L5-pCMV) o con un vector con una secuencia shRNA capaz de inhibir al mRNA del RP (MC4L5-O6). En este trabajo estudiamos el efecto del bloqueo estable del RP sobre la proliferación celular in vitro y sobre el crecimiento tumoral in vivo. La expresión estable del shRNA inhibió la expresión del RP en un 79+-8% evaluado por Western blot. Ensayos de proliferación (incorporación de 3H-timidina) y recuento celular no revelaron diferencias significativas entre los 3 grupos. Por el contrario, el inóculo de los tres grupos experimentales (1.5x106 céls/ratón) en ratones hembra BALB/c arrojó diferencias significativas. A los 46 días post-inóculo la línea MC4L5-Wt alcanzó un tamaño tumoral de 77.80+-19.83 mm2, la MC4L5-pCMV 66.50+-16.82 mm2 y la MC4L5-O6 estancó su crecimiento en 9.4+-10.24 mm2 (p<0.001). En otros dos ensayos similares la C4L5-O6 comenzó a crecer y luego regresionó totalmente. En la línea C4L5-O6 se observó un menor número de mitosis (Wt: 0.86+-0.09; pCMV: 1.31+-0.10; O6: 0.44+-0.10; p<0.01) y un mayor nivel de apoptosis (Wt: 1.47+-0.09; pCMV: 0.88+-0.11; O6: 1.91+-0.43; p<0.05) que en los controles lo que correlacionó con una escasa o nula marcación para BrdU. Por Western blot e in vivo se reveló una disminución en la expresión de RP. Los resultados demuestran que el RP es fundamental en el crecimiento in vivo de esta línea celular, reforzando la idea que el RP es crítico aún en el crecimiento HI. Las diferencias de crecimiento encontradas entre el modelo in vivo e in vitro indican que el RP sería necesario para la formación del tumor, por ejemplo como inductor de angiogénesis o reclutando el estroma tumoral, ambos prescindibles in vitro.